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标题:【讨论帖】分享你做蛋白质组学实验的protocol

49888[使用道具]
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发表于 2013-8-5 17:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

TCA/丙酮沉淀法
取新鲜水稻叶片1 g，液氮充分研成粉状后，再加入10倍体积的10％TCA/丙酮（含20mM DTT）----我加了大概有20ml（我用50ml的管提取的）。涡旋后静置于-20℃沉降蛋白过夜；随后在16000×g 4℃离心30min，弃上清液---我用枪吸掉的。沉淀重悬于的三倍体积-20℃预冷的90%丙酮溶液（含20mM DTT）（3次）每次大概加的体积为20ml。期间用玻璃棒打碎沉淀，让沉淀充分悬浮起来，且每次期间加完丙酮后放置-20度沉淀1小时后再离心。最后一次离心16000×g 4℃离心30min弃上清。室温风干沉淀，然后加裂解液直接裂解或者-80℃保存。这期间一直用的50ml管提取的。
希望版主给予修改指正！
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redbutterfly[使用道具]
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发表于 2013-8-5 17:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
双向电泳具体用在哪些实验？谢谢！
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PCR[使用道具]
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发表于 2013-8-5 17:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
有没有关于细菌蛋白的提取，具体点
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ukonptp[使用道具]
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发表于 2013-8-5 17:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
做根的话不推荐TCA丙酮法，浓度十分低，需要材料多，可以试试酚抽提，
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ii077345[使用道具]
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发表于 2013-8-5 17:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请问植物花的雌雄蕊用什么方法提取合适？有木有大虾知道的？？
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