小中大我们实验室从美国回来的教授改进了实验方法,提蛋白时很好用。
以六孔板为例,一般从培养箱取出后弃去培养基,用预冷的PBS洗或不洗,之后整个过程均在冰上进行。
取150ul/孔裂解液(RIPA:PMSF=100:1),一般在冰上震荡5分钟左右后就可离心12000g,20-30分钟后取上清,细胞碎片和核酸等即可浓缩沉淀在管底,一般是很少有胶状物质的的,LZ可以试试
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一 般 在 冰 上 震 荡 5 分 钟 左 右 后 就 可 离 心 12000 g ,20-30 分钟 后 取 上 清?
不 好 意 思,因 为 明 天 第 一 次 提 取 蛋 白,所 以 不 太 明 白,看 到 很 多 资 料 都是 说 冰 上 裂 解 30min,然 后 再 12000 rpm,离 心 5min。
所以想问下,我 要 提 取 的 是 人 贴 壁 肿瘤 细胞株 的 全蛋白,应该是选择前者还是后者呢?