液质联用 » 讨论区 » 分析百问 » 蛋白沉淀的一个小问题~用于液质~

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴

标题:[未解决]蛋白沉淀的一个小问题~用于液质~

  [未解决]本主题悬赏 可用分 10  
kidpk[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 31611
精华 6
积分 212
帖子 39
信誉分 128
可用分 713
专家分 2
阅读权限 255
注册 2009-12-23
状态 离线
11
 


QUOTE:
原帖由 茉莉花茶 于 2010-3-3 17:08 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
1.离心取上清
2.用有机相滤膜过滤(膜孔径0.2um,这是最稳妥也是最简便的方法,如果这你都嫌麻烦就别做样品处理了……我们的样品处理方法比这个复杂n倍!)
3. 色谱柱前面一定要加预柱 ...

你说的这个过滤就是说的用注射器前面加个滤膜过滤的那种?
顶部
kidpk[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 31611
精华 6
积分 212
帖子 39
信誉分 128
可用分 713
专家分 2
阅读权限 255
注册 2009-12-23
状态 离线
12
 


QUOTE:
原帖由 amelican_beauty 于 2010-3-3 17:12 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')


补充:最简单、省钱就离心取上清

我是离心取的上清,
我的办法是,蛋白沉淀之后,离心取上清,然后尝试过两种取的办法,一个是将上清倒出来。。。另外一个是将上清用一次性枪头吸出来。。。感觉结果都差不多。。。。因为为了提高回收率,还是尽量要把上清液都转移过来吧。。。

另外我觉得不是药物的问题,我单独操作血浆,不加药,也有类似的情况,这个中间是不是有什么诀窍?关于蛋白沉淀的。。。
顶部
小蹄子[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 26190
精华 0
积分 946
帖子 318
信誉分 101
可用分 1578
专家分 168
阅读权限 255
注册 2009-8-21
状态 离线
13
 

回复 #1 kidpk 的帖子

很简单的事情,取1——2mL够进样的加个滤膜过滤一下就行了。
本帖最近评分记录
  • miracle   2010-3-3 19:56  可用分  +3   谢谢朋友帮助解答!
顶部
kidpk[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 31611
精华 6
积分 212
帖子 39
信誉分 128
可用分 713
专家分 2
阅读权限 255
注册 2009-12-23
状态 离线
14
 

回复 #13 小蹄子 的帖子

什么样的滤膜?是插在注射器前面的那种?
顶部
amelican_beauty[使用道具]
一星
Rank: 6Rank: 6


UID 800
精华 10
积分 3617
帖子 993
信誉分 150
可用分 3475
专家分 930
阅读权限 255
注册 2007-11-21
状态 离线
15
 


QUOTE:
原帖由 kidpk 于 2010-3-3 18:31 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')



请问你可以说说这种微型过滤器具体的品牌么?没有用过。。。
再则就是,用普通的那种小注射器前面加个滤膜的好使么?我感觉复溶体积太小,过滤。。。。。。加大复溶体积又会影响检测限 ...

以前用过,进口的,没注意是什么牌子!作用同普通的过滤器一样,只是横切面小,液体损失少,接普通的注射器。能离心就离心吧,过滤的成本比较高,以前我们是用于量少,且需要无菌的药理方面。
顶部
kcuw589[使用道具]
五级
Rank: 5Rank: 5


UID 14592
精华 5
积分 2188
帖子 856
信誉分 124
可用分 2777
专家分 353
阅读权限 255
注册 2009-3-28
状态 离线
16
 
朋友,这么多样品一个人做吗?有时候不辛苦是不行的。
本帖最近评分记录
  • miracle   2010-3-4 09:24  可用分  +2   欢迎参与讨论!
顶部
kidpk[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 31611
精华 6
积分 212
帖子 39
信誉分 128
可用分 713
专家分 2
阅读权限 255
注册 2009-12-23
状态 离线
17
 

回复 #15 amelican_beauty 的帖子

可是离心之后还是有漂浮的。。汗。。。13000rpm啊。。。
另外就是,一般离心取上清液怎么取呢?用枪头感觉不能保证回收率啊,但是倒出来的话又会有少许沉淀倒出来。。。
顶部
zxlyid[使用道具]
一星
Rank: 6Rank: 6


UID 14677
精华 13
积分 3846
帖子 1145
信誉分 149
可用分 4655
专家分 987
阅读权限 255
注册 2009-3-30
状态 离线
18
 
建议这种情况用液液萃取试试,相对来说要比直接沉淀蛋白要干净的多,而且也没固相萃取那么麻烦
本帖最近评分记录
  • miracle   2010-3-5 00:16  可用分  +3   谢谢您的热心关注!
顶部
出国吧[使用道具]
一星
Rank: 6Rank: 6


UID 955
精华 5
积分 3012
帖子 797
信誉分 141
可用分 3400
专家分 811
阅读权限 255
注册 2007-12-4
状态 离线
19
 
1,要用初始流动相,不要用纯有机相。复溶时可以超声试试。

2,离心不能解决就要用过滤头
   
   Waters Syringe Filters, P/N WAT200508, 4mm PTFE 0.45um (好用,溶液残留非常少,低于10uL)

   Phenomenex regenerated cellulose membrane 0.45um, 4mm syringe filters, P/N AF0-3103-52.

   国产的也有,但是牌子忘了,上海的试剂公司就有。
本帖最近评分记录
  • miracle   2010-3-6 22:40  可用分  +2   谢谢您的帮助解答!
  • miracle   2010-3-6 22:40  专家分  +2   谢谢您的帮助解答!
顶部
luxuanbu[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 33538
精华 4
积分 585
帖子 256
信誉分 117
可用分 1834
专家分 60
阅读权限 255
注册 2010-2-16
状态 离线
20
 
楼主还要过膜呀 过完膜应该就没那么多了
顶部