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标题:【讨论帖】我在SDS-PAGE中所犯的错误

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发表于 2013-9-2 15:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

如要做8%的分离胶，我知道8%是指丙烯酰胺在凝胶中的百分比，但是我不知道它是怎么算得的，请大家帮帮我。谢谢！
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kuaizige[使用道具]
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发表于 2013-9-2 15:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请教:细菌粉碎后是用上清还是沉淀来跑电泳?
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kuaizige[使用道具]
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发表于 2013-9-2 15:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请教?细菌超声粉碎后用上清还是沉淀跑电泳?
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yjf1026[使用道具]
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发表于 2013-9-2 15:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请教?细菌超声粉碎后用上清还是沉淀跑电泳?

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你若是不知道表达的蛋白究竟是在上清，还是在沉淀，那你就得用“细菌超声粉碎后上清和沉淀”一起跑电泳，通过PAGE胶就晓得究竟是上清，还是沉淀有你所需要的目的蛋白。

沉淀可适当用蒸馏水稀释，和上清一样的方式处理SDS-PAGE模板。

再次推荐以下好的网站，图文并茂地分析了SDS-PAGE常出现的问题。愿对战友有所帮助！
SDS-PAGE: Examples of bad gels
cuturl('http://www.ruf.rice.edu/~bioslabs/studies/sds-page/sdsgoofs.html')
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yueban-1147[使用道具]
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发表于 2013-9-2 16:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我们在蛋白质印迹中发现：APS固体在室温保持的时间不长。有段时间我发现胶始终凝不了，用了师兄的APS（从我这里分装然后保存于－20°c）来配10％的APS后，胶就凝固了，所以我认为过硫酸氨最好是在低温保存。仅供参考。
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ii077345[使用道具]
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发表于 2013-9-2 16:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我用的是分子克隆提供的方法，配制12%的分离胶，水饱和的正丁醇封，但是总有少量的不凝，就是跟正丁醇接触的部分，请问是怎么一回事啊？我倒是一直这样做的，倒也能出来，今天看见大家在这里讨论，还是想问一问。谢谢！
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发表于 2013-9-2 16:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我做SDS-PAGE时用Bio－Rad的电泳槽，一直都很好用。但是用的时间长了有时会出现漏胶的现象。

我们试验室也会出现类似的状况，我认为主要是卡口没有卡紧，可以用滤纸垫在卡口处，这样玻璃与低下的皮垫之间的接触会更紧密，那么就基本不会漏胶了
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987789[使用道具]
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发表于 2013-9-2 16:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我想在次问一个问题,为什么我最近加完浓缩胶加好梳子以后,等干了以后浓缩胶却在两端有部分的干裂??
请指教
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xingyi08[使用道具]
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发表于 2013-9-2 16:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
细菌沉淀用1×或2×buffer有什么区别吗？

======================================

有时1×buffer会降低样品浓度，导致条带不清晰
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fei1226com[使用道具]
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发表于 2013-9-2 16:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我也是第一次做，我用的是BIO-RAD0.75mm,想请教大家加样时用什么东西加呢？用微量进样器吗？我把tip头前面加了个6号半针头可以伸到孔底，可是一加样就向两侧的孔溢出去，害得我每加一个样都要洗半天旁边的孔：（（
另外跑出来的条带总是有些歪斜，是什么原因呢？好的电泳跑的时候染料带是什么形状呢？
还有我用的12%的分离胶感觉看胶时很容易卷曲，不知道哪里出了问题。
谢谢各位指教啦。

有专用的上样枪头啊，适合20ul加样枪用的。大的耗材公司都有卖。
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