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标题:【讨论帖】我在SDS-PAGE中所犯的错误

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发表于 2013-8-31 16:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 xingyi08 于 2013-8-31 16:54 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
胶的配方大家的实验室都应该做过一些修订，能否公布出一些大家觉得效果比较的胶的配方？

我参考的是：汪家镇的＜蛋白质技术手册＞，那本书还是很常用的。
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发表于 2013-8-31 16:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
1。可用聚丙酰胺快速胶（加大AP和TEMED的浓度）封底；
2。AP -20C分装保存，可至3个月；
3。做好分离胶后，要小心地用水封，避免空气影响胶的聚合；
4。细菌沉淀加1XBuffer，可溶性样品加2XBuffer，煮5min，上样10-20ul；
5。剥胶用Bio-Rad的剥胶塑料板非常方便，用注射器注水冲的方法易搞破胶。

===========================================

TEMED可以加倍，只要在10ul以下，AP可以加二到三倍。
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发表于 2013-8-31 16:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

有个师兄做了块尽一平米的胶，他狂加TEMED与AP，疯狂，不过很有效。
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阿凡提[使用道具]
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发表于 2013-8-31 16:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 dmg 于 2013-8-31 16:56 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

有个师兄做了块尽一平米的胶，他狂加TEMED与AP，疯狂，不过很有效。

有什么用处？怎么跑呀？
pfpf
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发表于 2013-8-31 16:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
他是法医的，好象用来做分析吧，具体我也不是很清楚
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发表于 2013-8-31 16:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
有个师兄做了块尽一平米的胶，他狂加TEMED与AP，疯狂，不过很有效。

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弓虽！
请问他是用什么板配的？多厚？是不是要跑双向？
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minran_1980[使用道具]
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发表于 2013-8-31 16:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
如果有条件，可以用Bio-rad的电泳仪，就不用封了，非常方便。
至于APS可以先配好，放到-20度冰箱冻存。
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发表于 2013-8-31 16:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请问跑小肽分子，除了加甘油及胶浓度还有哪些好办法？能否具体提供帮助？谢谢了
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发表于 2013-8-31 16:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

提议有经验者多吐真言
如此才能推动中国生物技术打败老美
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发表于 2013-8-31 16:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我也是第一次做，我用的是BIO-RAD0.75mm,想请教大家加样时用什么东西加呢？用微量进样器吗？我把tip头前面加了个6号半针头可以伸到孔底，可是一加样就向两侧的孔溢出去，害得我每加一个样都要洗半天旁边的孔：（（
另外跑出来的条带总是有些歪斜，是什么原因呢？好的电泳跑的时候染料带是什么形状呢？
还有我用的12%的分离胶感觉看胶时很容易卷曲，不知道哪里出了问题。
谢谢各位指教啦。
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