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标题:【讨论帖】我在SDS-PAGE中所犯的错误

kuaizige[使用道具]
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发表于 2013-8-31 17:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
将分离胶gel solution 复温至室温后使用可以避免分离胶聚合后出现分层.
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kuaizige[使用道具]
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发表于 2013-8-31 17:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
遇到一怪事：电洗脱后的蛋白SDS-PAGE，银染后发现蛋白泳道呈金黄色，而其他区域背景是棕色，不知是何原因，各位高手请指教！
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idea2011[使用道具]
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发表于 2013-8-31 17:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

sds比较稳定，一般可以常温保存不会失效，但AP很容易失效，我的经验是将其干粉定量分装于EP管中，固体状态可以长期保存，临用前加入ddH2O溶解就可以了。
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发表于 2013-8-31 17:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
若使用用了长时间的系统灌胶，又漏的话：可用封口膜在装好的二玻璃板封口，压紧，就少漏了。
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发表于 2013-8-31 17:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

AP确实需要现配现用，不能存在侥幸心理，我开始做的时候就因为不重视吃了亏；另外我的TEMED（4度保存）和SDS（常温保存，温度低了易结晶，可以放到温箱中溶解）一直用了半年都没有问题；电泳液短期使用没有问题，稀释后使用建议不要超过三次！
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发表于 2013-8-31 17:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

现配的AP可以让胶凝的好一点
而且有时AP潮了也会出现胶不凝

我们用微量加样器，就是50ul的注射器，针头是像细铁丝一样的
很方便
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发表于 2013-8-31 17:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我们教研室配的10%SDS100ml刚开始溶得很好，不过在室温放置2~3周就出现灰网状物，刚开始怀疑是瓶子不干净，倒掉重配又是这样，不过倒是还能用。不过用的时候让人提心吊胆，大家有解决的好办法吗
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发表于 2013-8-31 17:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我跑SDS－PAGE的时候，会在最两边的加样孔加入等量的纯加样缓冲液。这样可以防止边缘效应使胶比较容易跑齐；而且我加样的时候习惯在MARK后面空一个胶孔，也可以帮助记忆点样的位置的。
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ero11[使用道具]
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发表于 2013-8-31 17:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我用2%琼脂封胶，效果不错，关键是槽内要多到点儿，否则易漏胶。
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研究僧112[使用道具]
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发表于 2013-8-31 17:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我们教研室配的10%SDS100ml刚开始溶得很好，不过在室温放置2~3周就出现灰网状物，刚开始怀疑是瓶子不干净，倒掉重配又是这样，不过倒是还能用。不过用的时候让人提心吊胆，大家有解决的好办法吗

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换SDS吧（换个厂家的或者换个经销商的），我也遇到过，后来SDS就永远不和那家经销商做了，问题也再没有出现过。
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