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标题:[未解决]用甘油保存的话，需要加入多少抗生素呢？

  [未解决]本主题悬赏 可用分 10  
fantacy[使用道具]
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发表于 2013-9-1 11:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

用甘油保存的话，需要加入多少抗生素呢？

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BL21菌株内含PET30a质粒，需要进行保存，用甘油保存的话，需要加入多少抗生素呢？烦请大家帮助一下！
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hey_bye[使用道具]
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发表于 2013-9-1 11:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
不需要再额外加抗生素的，我没加过，直接按比例将菌液加入灭菌好的甘油就好
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青青子衿[使用道具]
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发表于 2013-9-1 11:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
加入甘油后，直接-80度冻存 摇菌时要加抗生素。摇好的菌液与甘油按照比例混合时不用补抗生素了。在-80°C菌是不扩增的，不存在质粒丢失问题。
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兜兜[使用道具]
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发表于 2013-9-1 13:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
一般15-20%的甘油，-80冻存，甘油浓度高了容易引起突变，低了会造成细胞膜的损伤，引起死亡。菌株最好半年活化一次(我们实验室一放几年不活化，也没问题，如果是重要的菌株还是定期活化的好)。至于抗生素，摇菌时是加的，然后直接把甘油加到菌液中就可以了，不需要补加。
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mr.henry[使用道具]
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发表于 2013-9-1 18:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
20℃条件下也是一样的浓度，你想想温度低了，冻伤小了，怎么反而增加甘油浓度呢，只不过-20℃保存的时间要短些
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发表于 2013-9-1 18:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
一般不用添加抗生素！
一般是不需要加抗生素的，因为本身你加的菌液中就含有AMP了呀！
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小书虫[使用道具]
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发表于 2013-9-1 18:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
摇菌活化菌的时候加抗生素是为了让有抗性的目的菌生长抑制杂菌生长。保菌时不加抗生素。800μ新鲜l菌液+200μl甘油（80%浓度）于1.5ml EP管，保存于-80℃或者-20℃冰箱。-20℃冰箱里最好两三个月活化一次再保菌。-80℃可以存放更久。
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