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标题:【讨论帖】Western 及抗体

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发表于 2013-9-5 16:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 abc816 于 2013-9-5 16:31 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

请教一下，半干转是否要求膜，3m滤纸，胶同样大小？
因为胶大小不一定规则，膜和滤纸会大一点，那样会不会短路？
什么是短路？如何控制和发现短路呢？谢谢指点 ...

一般参照 膜>= 滤纸> 胶, 就行，

你转移前和转移过程中看看电压就行，正常的半干是慢慢变高的， 最后结束时一般是开始的1.5-3倍都是正常的。

一般Buffer和滤纸选的对就不会短路
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发表于 2013-9-5 16:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
可否把你现有的实验设备及实验条件告诉我， 我好告诉你一个比较合理的Protocol，另外，方便的化把要检测的蛋白和实验目的也告诉我好吗？
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发表于 2013-9-5 16:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
能否具体点呢？就你现在告诉我的这点情况，我很难判断，
不过我觉得问题可能在，
1. 制样及上样，
2.转移。
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发表于 2013-9-5 16:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

想请教Western的结果如何分析，一定要有内参照吗？
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发表于 2013-9-5 16:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


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原帖由 lixi559 于 2013-9-5 16:38 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

想请教Western的结果如何分析，一定要有内参照吗？

不一定,但是最好能有Marker,我做的Western 都用了Marker
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发表于 2013-9-5 16:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


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原帖由 NBA 于 2013-9-5 16:38 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')



不一定,但是最好能有Marker,我做的Western 都用了Marker

不好意思，请具体说一下该怎样分析结果，需要什么软件
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发表于 2013-9-5 16:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


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原帖由 lixi559 于 2013-9-5 16:39 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')



不好意思，请具体说一下该怎样分析结果，需要什么软件

如果你做定量或办定量，至少要用到一个光密度扫描分析软件，
如果不是，直接分析就可以了
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发表于 2013-9-5 16:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我的样品制样：以上样缓冲液直接裂解细胞或是以三去垢剂裂解细胞。
上样：每孔上样大于500000个细胞。（普通小电泳槽）
转移：转移后以丽春红染色，可见膜上条带染色较强。
二抗的检测：以显色剂检测，二抗没问题。
封闭室温2小时，一抗2小时，二抗1.5小时。
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发表于 2013-9-5 16:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 windy+++ 于 2013-9-5 16:40 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
我的样品制样：以上样缓冲液直接裂解细胞或是以三去垢剂裂解细胞。
上样：每孔上样大于500000个细胞。（普通小电泳槽）
转移：转移后以丽春红染色，可见膜上条带染色较强。
二抗的检测：以显色剂检测，二抗没问题。
封闭室温2小时，一 ...

可否告知样品的分子量， 和转移方法和时间？
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发表于 2013-9-5 16:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #19 NBA 的帖子

样品分子量为：170KD，转移方法：半干为25－35伏，电流小于150mA，1－1.5小时。水浴为恒流350mA,1.5小时。
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