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标题:【讨论帖】Western 及抗体

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发表于 2013-9-5 17:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 mimili_901 于 2013-9-5 17:19 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
上样缓冲液到底是1*SDS还是2*SDS？
所谓1*SDS是加等量样本前的浓度，还是加等量样本后的浓度？

其实是无所谓的， 我上样时用5X sample buffer ,只对半用，相当于1:2.5用， 都没事。
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mimili_901[使用道具]
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发表于 2013-9-5 17:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 NBA 于 2013-9-5 17:19 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')


其实是无所谓的， 我上样时用5X sample buffer ,只对半用，相当于1:2.5用， 都没事。

哦！那是不是最好用新一点的，因为我前两次用的SDS都已经有一年拉，不会有影响吗？
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发表于 2013-9-5 17:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 mimili_901 于 2013-9-5 17:20 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')


哦！那是不是最好用新一点的，因为我前两次用的SDS都已经有一年拉，不会有影响吗？

重配总会好一点的
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发表于 2013-9-5 17:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我想作内皮细胞(细胞数 5*100000)核因子的Western blot,能否因其在细胞浆中低表达使结果阴性.
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发表于 2013-9-5 17:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我觉得有3个原因，
1.一抗有问题，效价太低，且未纯化。
2.表达量太低
3.你提蛋白时是否出了问题

===========================================================================================================

谢谢,我也觉得可能有第一个问题,因为是直接取自病人血清,有没有可能是M15菌体蛋白与人血清中抗体有较高的抗原性,而纯化蛋白又不可能绝对纯,我换过其他的菌表达,对PQE-30质粒载体好象不敏感,几乎没有表达.
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发表于 2013-9-5 17:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我的western结果已经扫描存在电脑里了，能不能下载一个软件，检测电脑图像里的条带的光密度？
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发表于 2013-9-5 17:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
除非表达量很低否则不会做Western是阴性结果的。
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NBA[使用道具]
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发表于 2013-9-5 17:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
有时间就经常跟我讨论把， 我做了500多个融合蛋白了
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NBA[使用道具]
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发表于 2013-9-5 17:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
最好是用胶片
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vivian4123[使用道具]
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发表于 2013-9-5 17:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

谢谢请问怎样检测ECL底物的活性？
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