小中大你好！我最近做了几次western，目的是检测细菌全细胞蛋白中我的目的蛋白（12.5kd），但是至今未得到信号带。条件是：NC膜，200mA两小时转膜。一抗（抗血清）1：2000，室温1小时；二抗1：2000，室温1小时。
NBT/BCIP显色，全细胞蛋白由TCA沉淀法得到。我本人对失败原因的初步分析是：
1.检测方法的灵敏度不够。由于目的蛋白在全细胞蛋白中含量较低，且分子量又小，用常规生色反应难以检测到。因此可换ECL试一下。
2.NC膜对于小蛋白的吸附能力不够强，或在转膜过程中小蛋白的转移效率较低。可考虑换成PVDF膜。
我在这方面的经验不足，想请你帮忙分析一下还有没有什么其他原因？能否推荐一下你认为好用的检测系统。最后十分感谢你对我们大家的热心指导：）
