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标题:【讨论帖】Western 及抗体

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发表于 2013-9-5 17:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
一般做磷酸化蛋白时都是用的5%BSA封闭液就够了，（再加1%母鸡卵白蛋白 可能会更好， 但我没有试过。
我用过5%milk做过，结果都很好，要具体事情具体分析。
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发表于 2013-9-5 17:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请教：
我用的是可视marker（BIO_RAD），但是电泳总跑不全8条带，请问什么原因？怎样改善？
胶用过8％，10％，12％，都是这样。marker是新买的。
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发表于 2013-9-5 17:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你pre-stained marker 8条带是多大的分子量？
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发表于 2013-9-5 17:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 gogo 于 2013-9-5 17:53 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

请教：
我用的是可视marker（BIO_RAD），但是电泳总跑不全8条带，请问什么原因？怎样改善？
胶用过8％，10％，12％，都是这样。marker是新买的。

1. Antibodies, a laboratory manual, wrote by Ed Harlow ,david lane
2.抗体技术实验指南
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gogo[使用道具]
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 小中大

我pre-stained marker 8条带分子量在6kd---198kd之间。
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 小中大


QUOTE:
原帖由 gogo 于 2013-9-5 17:54 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

我pre-stained marker 8条带分子量在6kd---198kd之间。

你看看书1，2%的胶就不能分离开6kd的带！！！
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发表于 2013-9-5 17:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我们是开始做Western的，转了好几次膜不知为什么都没有转上去，但mark每次都转上去了，用丽春红染膜什么也没有，胶用考马斯亮兰染有时有条带，有时又没。
不知出了什么原因？请多多指教。
不胜感激！
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发表于 2013-9-5 17:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 雪山飞鹿 于 2013-9-5 17:55 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
我们是开始做Western的，转了好几次膜不知为什么都没有转上去，但mark每次都转上去了，用丽春红染膜什么也没有，胶用考马斯亮兰染有时有条带，有时又没。
不知出了什么原因？请多多指教。
不胜感激！ ...


你是否测量样品浓度？，还有查查Sample buffer出问题没有
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发表于 2013-9-5 17:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #88 NBA 的帖子

样品的浓度大约40ug每孔，转膜时的电压是恒压好还是恒流好，一般是怎样的条件，我们的机子是mini-8.1 biometro的，转膜的条件是150v，2小时，但总是转不上去。
不知出了什么原因？请多多指教。
不胜感激！
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发表于 2013-9-5 17:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你可以尝试先用M15菌体总蛋白吸附病人血清后，再western blot，可以去除非特异条带。
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