药物分析

求助： 用柱层析分离异黄酮类物质
我用30cm的柱子分离异黄酮类物质，那种物质最大吸收波长在270nm，我用的是245nm 检测，因为紫外灯没有270nm，可是我跑了6倍的柱体积都没有检测到，后来我把全部的接液回收，蒸干后有异黄酮的混合物，可能是因为我加样量少了，可是再加大样的浓度的话，样品在乙酸乙酯里就不容了，又不能用甲醇溶，因为甲醇和流动相之一石油醚是不溶的，我想问，怎么才能把这种在270nm的物质检测出来呢， 用245nm的灯点样品，10mMol/L 才会出一个颜色较深的点，那在物质流出来时，能达到10mMol/L吗，怎么计算，跟流速有关系吗

你说的不清楚，首先你的柱材料用的是什么？是硅胶，聚酰胺，还是SephadexL H-20？我用硅胶柱分过，样品混合物点板子有4个黄酮，拿吡啶溶解的上样，流动相是氯仿-甲醇，最后全分到了，其中有一个就是异黄酮。我觉得这和吸收波长没多大关系，只是你的洗脱系统没选好，如果你选的哪个系统合适的话，你要的东西在柱子里的保留时间是不一样的。因为后来用制备液相分，同样条件，HPLC扫描后4个黄酮波长从254-290不等，但保留时间不同，可还是全部拿到了。

PS：我的经验，黄酮大多数溶解性不好，要快快过柱子，不然好多都凝固到柱子材料里面洗不出来了。

先谢谢你了  我用的是硅胶 流动相是乙酸乙酯和石油醚  用乙酸乙酯溶解的样品 我是觉得如果加样量小的话 用紫外灯检测 不久看不出点来了吗  就没有办法接样了 用吡啶 会不会造成样品太粘  不容易洗脱出来  谢谢

不会拌样吗？用甲醇溶

至于检测，你可以选择HPLC啊，取少量液体，用甲醇

用甲醇溶样品的话，就和流动相不互溶了，这样就不能分离了吧，检测是在接样品时检测的， 怎么能拖到测液相再检测啊 ，要是那样的话，直接用液相制备不就行了  液相制备费时费乙腈  才想要用柱层析的  怎么办啊  谢谢

你可以经收集到的样品先浓缩一下使浓度高一些，再点板。