小中大第一张图是还没染色的，箭头是溴芬兰，很扩散，不成一条细线，我没说清楚，对不起。第二张是第一张的胶染色，脱色后照的照片，我样品加了复合蛋白酶抑制剂，应该不会降解把？我提取的是淡色库蚊总蛋白，液氮粉碎虫体，按照1克组织加5ml裂解液（8M尿素，4％CHAPS, 65mMDTT），4度一小时，不时颠倒混匀，10000rpm，30min,取上清，15000rpm,20min,取上清，-80度保存。我又跑了一个胶，加了MARKER，MARKER跑得很好，但是没有我提取的蛋白质条带，仍然是拖尾，上样倍比稀世了，1/2，1/4，1/8都没有明显条带，蛋白样品测了浓度，相当于每个孔50微克蛋白，并不高啊！请问分离胶，浓缩胶的Tris的PH，还有电泳缓冲液的PH,是不是都要调得很准？否则就是拖尾？
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到了分离胶，溴芬兰开始扩散，通常可能是电极缓冲液配的不对或用的次数太多了，没有足够的离子强度推动蛋白向前移动，由于分离胶和浓缩胶的作用不一样，在分离胶中蛋白的移动完全是靠蛋白的分子量，并不具有浓缩效应，所以在分离胶中就开始扩散，一般在跑的时候可以发现跑得很慢。也可能是pH调的不准，在我看来跑胶的时候PH很重要，所以配的时候要注意这一点。蛋白MARKER跑得好，而目的蛋白却不好，有可能是你稀释的太多了，通常在高表达的时候，有必要稀释，一般提取先不要稀释看看，问题不是很大的，而且拖尾不是蛋白浓度高导致的，是因为有杂质，上样前先离下心，比较好。而且就从你的第二张图上看到，也有些像没配浓缩胶，光用分离胶跑的，光用分离胶跑的话，跑出的蛋白条带就是不是一条带，有些散的，而且拖尾很严重。所以也有可能你的问题在浓缩胶上面，没配好浓缩胶。
