蛋白质与蛋白组学 » 讨论区 » 经验共享 » 【求助】浓缩胶

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴

标题:【求助】浓缩胶

04906[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 73544
精华 0
积分 599
帖子 858
信誉分 100
可用分 5155
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-9-24
状态 离线
21
 
我心急,170V从头到尾70分钟;
我节俭,电泳液一直在用;
但条带(考染)都很好呀!
顶部
dog002[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 76386
精华 0
积分 916
帖子 1452
信誉分 100
可用分 8133
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-4
状态 离线
22
 
蛋白大小不同,对胶的浓度要求不同,要看清,分辨条带还是要慢跑。缓冲液用久了,当然电泳效果不好,离子浓度变化了嘛。
我们上半缓冲液只用一次,下半可反复使用。
顶部
am10[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 76183
精华 0
积分 676
帖子 971
信誉分 100
可用分 5735
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-2
状态 离线
23
 
跑恒压电泳可以是浓缩胶100V ,分离胶60v,这个没问题的,完全可以的。我跑过很多次,都很好。并不是写反了。尽管有许多文献是分离胶电压比浓缩胶高。
我的感觉就是浓缩胶和分离胶的PH一定要调准。
其二是蛋白量是不是可以少点?我一般都只上20~30ug, 跑出来比较好。
夏天跑电泳最好加冰浴,冬天跑就不必了。用bio-rad 的挺好。
电泳液可用4~5次的。内液和外液分开回收。外液有时我都用7~8次。
我比较同意楼上的观点,即浓缩胶大点电压,尽量在短的时间内压窄,而分离胶慢点跑,分得开些。就像赛跑一样,100米短跑可能看不出差别,但1000米,5000米跑慢慢地就拉得开距离了,呵呵。一个不太贴切的比喻吧。供参考。
顶部
woshituzhu[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 75774
精华 1
积分 384
帖子 443
信誉分 102
可用分 3001
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-10-27
状态 离线
24
 

我做sds-page的时候也是跑不到一条线上
很郁闷
一些师兄师弟都说很奇怪
他们都能跑到一条线上
难道是因为我的样品没弄好??
说浓度过高的话,可是又没条带
不过里面含有很多糖,我现在就是担心是糖的影响
很麻烦
顶部
wsll[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 76794
精华 0
积分 423
帖子 505
信誉分 100
可用分 3393
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-9
状态 离线
25
 

很奇怪!
有的实验书上说要保持恒压,有的要恒流,到底应该怎样?
我在的实验室都是恒流跑电泳的。
顶部
wsll[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 76794
精华 0
积分 423
帖子 505
信誉分 100
可用分 3393
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-9
状态 离线
26
 

我觉得和胶的浓度有关。我用人血清稀释100、200、400.、800、1000、2000倍后作为样品,在4%浓缩胶与12%分离胶中就能压缩成细线,但是在5%浓缩胶和15%分离胶中就不能压缩成细线,总有1~2毫米宽。但不管如何,染色后的条带还是清楚的。
顶部
flower-201[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 74055
精华 0
积分 443
帖子 605
信誉分 100
可用分 3785
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-4
状态 离线
27
 
我们是浓缩胶、分离胶都160V,有BIO-RAD的小胶,也有六一的大胶,跑出来都非常好
顶部
qiangren789[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 73754
精华 0
积分 333
帖子 365
信誉分 100
可用分 2651
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-9-27
状态 离线
28
 

这个我也有点疑问,按照物理知识,恒流的话,也就是恒定的产热,不考虑温度对电阻的影响,这个时候,电压是持续上升的,我以前跑恒流30ma,到后来,电压都到300v,但效果也还可以(bio-rad的mini),而且很省时间,一个多小时吧,后来跑恒压,效果也还可以,就是时间稍微长点,一般我在分离胶时用150v,刚开始这个时候电流可以达到60ma。
所以,我的理解是恒压恒流都可以,但要根据设配提供的限度,我看有些人做得时候先用恒流跑,跑到电压上去了,再用恒压跑,呵呵,谁知道效果是不是更好呢!
顶部
yueban-1147[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 75776
精华 0
积分 692
帖子 1064
信誉分 100
可用分 6113
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-27
状态 离线
29
 

我有一段时间跑SDS-PAGE的时候指示剂也是跑得比较宽,在浓缩胶里无论如何也压不成一条细线,那时我用的是按照《抗体技术实验指南》配制的10X电泳缓冲液。在此之前几个月我首次学着跑SDS-PAGE,用的是别人配的缓冲液,用同样配比的胶跑的,在浓缩胶和分离胶界面的地方压缩得很好。我重新配了各种缓冲液、仔细地调了pH,可还是同样跑得很宽。看了不少资料,最终找到了原因。后来指示剂在到达浓缩胶和分离胶交界面的时候都能跑直、并且成为一条细线。

这个原因是挺不起眼的:《抗体技术实验指南》中10X电泳缓冲液的配制那里说要把pH调到8.3;而后来看到另外一本经典的分子生物学技术书籍上说这种10X电泳缓冲液是不需要调pH的,稀释成1X的以后pH约为8.3,一些别的书也有这样的说明。于是配了一次不调pH的10X电泳缓冲液,别的没有换,跑得就很不错了。如果你在操作方面没什么问题,注意一下所用溶液方面是否存在问题——盐浓度、pH等方面。

有时出问题的因素就是那么不起眼的,好好研究研究,会找到原因的。
顶部
zsxan1990[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 76272
精华 0
积分 442
帖子 604
信誉分 100
可用分 3776
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-3
状态 离线
30
 
热扩散在电泳中的控制极端重要,一般的条带变粗都与温度升高引起热扩散有关。接冷凝水循环降温!会有很好的效果!做个预试摸一下最佳的样品浓度。
顶部