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原因估计有以下几种：
1.目的蛋白量不够。
虽然你同样的上样，其他蛋白可以检测到，并不代表这种蛋白就一定可以。不知道你目的蛋白是什么，在哪里表达。你查过该蛋白的表达量如何吗？建议你确定下再说。因为有的蛋白表达量很低的，尤其是细胞核内蛋白。（不妨加大量试试，不犯法的）
2.一抗问题。
你看不到条带，而转膜和二抗似乎都没有问题。那就应该是一抗的问题了。
你可以把提高一抗浓度，过夜，完了第二天再室温摇一个小时，然后洗三次，每次5分钟。注意严格控制时间，一抗不要洗过了。
如果重复几次还不行，估计你就要找公司说说了，有时候不见得他们的抗体都没问题。
