小中大测beta-actin时，最后得到的胶片为什么什么都看不到呢，是什么原因呢?在我做的上一天一个师兄也是得出同样的结果。
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1.首先确定beta-actin和二抗是否过期，没过期的话beta-actin和二抗可以重新配制。
2.要注意二抗和beta-actin是否配套，如果beta-actin是鼠抗，二抗要用抗鼠的。
3.看二抗是碱性磷酸酶标记（AP）的还是辣根过氧化物标记（HRP）的，如果是AP标记的是不能用ECL发光法测的。
4.可能是蛋白上样量少了（这个可能性不大）。
5.一抗、二抗孵育时间不够。（一般一抗要37度2个小时，或4度过夜。二抗要37度2个小时）
6.还有就是转膜的时候蛋白根本没有转上去（湿转转膜时间视目的蛋白大小而定，时间长了没关系，但不要短，有些人说转膜会转过了，但在我做实验过程中没发现会转过的情况，建议200mA 2个小时，这个条件90kd以下的基本上都能转上去）。
