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Triton-114是很粘稠的,国内华美、生工都有分装。
它的溶解原理是 在低温(4度)的时候溶解度高,根据有机物相似相溶的原理这时膜蛋白就会和Triton-114相溶;在37度反而溶解度低,从而将大部分Triton-114连同膜蛋白一起析出分在下层有机相。
根据你的描述,没有分层可能有三个原因
1.可能你用的管太大,1.5mLEp管和50mL离心管的分离效果差很多
2.离心的时候要用水平转头,2000rpm 离心5-10min就行,离心完毕,小心取出就可以看到分层。
3.可能你Triton-114的配制方法不对,我是将Triton-114加入TBS(10mMTris,150mM NaCl,pH7.4)中形成终浓度1%的Triton-114,保存在4度,用时直接重悬细胞,冰浴作用30分钟后放入37度作用5-10分钟(根据管子大小),水平转头离心。
一些后续步骤:将上述沉淀(Triton-114与膜蛋白的混合物)加入9倍体积冰冻丙酮,冰浴40分钟,10000rpm离心20-30分钟,这时就可以将上层的丙酮和Triton-114一起去除,从而得到膜蛋白。