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标题:【求助】有关Triton X-114提取膜蛋白的问题

mogu[使用道具]
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发表于 2013-10-12 13:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
还有一事请教。终浓度1％的Triton X-100的TBS作用，约1ml（置于1.5mlEP管中）离心后通常可以得到的去污剂相有多大体积？
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yychen[使用道具]
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发表于 2013-10-12 13:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

有机相体积有多大，小于0.5ml吧，这很重要吗？我觉得你只要分层清晰就行了。
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vivian4123[使用道具]
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发表于 2013-10-12 13:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

沉淀（Triton-114与膜蛋白的混合物）可以直接加sds loading buffer跑SDS PAGE么？
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831226[使用道具]
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发表于 2013-10-12 13:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我用角转也能分层啊~
你的样本中是否还有其他成分,如高浓度的盐影响分层?
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831226[使用道具]
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发表于 2013-10-12 13:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
沉淀（Triton-114与膜蛋白的混合物）可以直接加sds loading buffer跑SDS PAGE么？

=========

没问题
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greenbee[使用道具]
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发表于 2013-10-12 13:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我把去垢相（Tritonx-114与膜蛋白的混合物）加水调至和水相相同的体积，直接加loading buffer，跑SDS-PAGE，去垢相几乎没有什么带，水相的蛋白带很清楚，这是怎么回事啊？
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发表于 2013-10-12 13:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我把去垢相（Tritonx-114与膜蛋白的混合物）加水调至和水相相同的体积，直接加loading buffer，跑SDS-PAGE，去垢相几乎没有什么带，水相的蛋白带很清楚，这是怎么回事啊？

===============

那就沉淀一下吧
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发表于 2013-10-12 13:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请教各位战友是否膜蛋白的提取方法和胞浆蛋白的提取方法不一样?用的裂解液也不同吗?感谢
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mogu[使用道具]
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发表于 2013-10-12 13:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我用角转也能分层啊~
你的样本中是否还有其他成分,如高浓度的盐影响分层?

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我的裂解液是10mMTris，150mMNaCl，pH7.4的TBS，10mM的PMSF和10ug/ml的Aprotinin，盐浓度不会很高啊，不致影响分层。而且，我用纯水配成1％的TritionX114溶液，可是37度也没有cloudy。按照楼上的建议，我用水平转子离心，可是结果一样。
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7437654[使用道具]
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发表于 2013-10-12 13:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

为什么没有人回答我的问题啊,tritionX114是那个公司的啊，那里有售，再次感谢那为高手说一下啊，急等用啊，感谢
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