【求助】有关Triton X-114提取膜蛋白的问题 - 经验共享

蛋白质与蛋白组学 » 讨论区 » 经验共享 » 【求助】有关Triton X-114提取膜蛋白的问题

28 3/3 ‹‹1 2 3

需要登录并加入本群才可以回复和发新贴

打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:【求助】有关Triton X-114提取膜蛋白的问题

qumm1985[使用道具]
三级
Rank: 3

UID 76908
精华 1
积分 475
帖子 546
信誉分 102
可用分 3616
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-11-10
状态离线

发表于 2013-10-12 13:22 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我也按楼上的方法做的,用丙酮沉淀以后可以看到白色的渣渣状东西,可是离心后放一会就变的透明,我师姐说那些可能是糖类,跑一向电泳,没有条带,成弥散状,就象瀑布一样,请问这是怎么回事?如何解救呢??
我做的是酵母

tuuu2[使用道具]
四级
Rank: 4

UID 77597
精华 0
积分 507
帖子 674
信誉分 100
可用分 4211
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-18
状态离线

发表于 2013-10-12 13:22 资料个人空间短消息加为好友

小中大

TBS含Triton X-114重悬细胞后是否影响超声裂解细胞？

bamboo16[使用道具]
四级
Rank: 4

UID 79663
精华 2
积分 572
帖子 696
信誉分 104
可用分 4391
专家分 20
阅读权限 255
注册 2011-12-14
状态离线

发表于 2013-10-12 13:23 资料个人空间短消息加为好友

小中大

请问tritonX114和tritonX100有什么区别呢？

182****1747[使用道具]
一级
Rank: 1

UID 181513
精华 0
积分 2
帖子 3
信誉分 0
可用分 15
专家分 0
阅读权限 255
注册 2017-8-16
状态离线

发表于 2017-8-16 18:36 资料个人空间短消息加为好友

小中大

回复 #2 qumm1985 的帖子

请问有提膜蛋白的配方和protocol吗？

fengzhoajie[使用道具]
一级
Rank: 1

UID 412723
精华 0
积分 11
帖子 1
信誉分 0
可用分 5
专家分 0
阅读权限 255
注册 2023-2-7
状态离线

发表于 2023-2-8 15:05 资料个人空间短消息加为好友

小中大

请问这种方法是不需要超离的纯化膜蛋白方法吗？哪里有具体的protocol呀？

chenzhen2016[使用道具]
三级
Rank: 3

UID 440604
精华 0
积分 261
帖子 261
信誉分 0
可用分 1026
专家分 0
阅读权限 255
注册 2023-6-8
状态离线

发表于 2023-7-7 11:11 资料个人空间短消息加为好友

小中大

Triton X-114是一种非离子表面活性剂，具有相变温度（cloud point）。在低于其相变温度（约20-30°C）时，Triton X-114以单一相形式存在，并能与水混溶。但当温度升高到其相变温度以上（通常为约37°C），Triton X-114会分为两个相：水相和去污剂相。这种相分离的现象可以用于膜蛋白的富集和提取。

在您的实验中，Triton X-114溶液未能在37°C下形成两个相的可能原因有几种：

温度不够：确保实验中的水浴温度达到37°C，并在37°C下持续一定时间。确认温度计准确性并使用适当的水浴设备。

Triton X-114浓度问题：确保使用正确浓度的Triton X-114溶液。过低的浓度可能导致相分离失败。

溶液制备问题：Triton X-114溶液的制备需要充分搅拌和均匀混合，以确保化合物溶解均匀。确保在制备过程中没有发生漏液或其他不良因素。

溶液纯度问题：如果Triton X-114溶液受到污染或存在其他杂质，可能会影响其相分离的能力。使用新鲜的、纯净的Triton X-114溶液进行实验。

如果问题仍然存在，可以尝试调整实验条件，如增加Triton X-114的浓度、延长处理时间或改变提取方法。另外，与同行或相关领域的专家讨论，获取更具体的建议和解决方案也是一个好的选择。

chenzhen2016[使用道具]
三级
Rank: 3

UID 440604
精华 0
积分 261
帖子 261
信誉分 0
可用分 1026
专家分 0
阅读权限 255
注册 2023-6-8
状态离线

发表于 2023-8-8 15:48 资料个人空间短消息加为好友

小中大

Triton X-114是一种非离子表面活性剂，通常用于提取膜蛋白以及水相和脂质相的分离。在正常情况下，Triton X-114在低温下（如4°C）与水混合是可以溶解的，而在37°C时会相分离为水相和脂质相。如果你在实验中发现Triton X-114的水溶液没有在37°C时产生混浊现象，有可能是以下几个原因：

1. Triton X-114质量问题：首先要确保你使用的Triton X-114质量良好。可能的原因之一是试剂出现质量问题，导致其在37°C下没有像预期那样分离。

2. 试剂保存条件： Triton X-114可能对温度和湿度比较敏感。如果试剂曾暴露在高温或湿度条件下，可能会影响其性能。确保试剂在正确的存储条件下保存。

3. pH影响： Triton X-114的性能可能受到pH值的影响。如果水溶液的pH值不适当，可能会影响其相分离的能力。

4. 不适当的混合：在将Triton X-114水溶液暴露在37°C时，确保你充分地混合溶液，以促使相分离的发生。使用适当的混匀设备或方法来确保均匀混合。

5. 使用的水质：水的质量可能会影响试剂的性能。使用纯净的去离子水来制备试剂，以避免不必要的影响。

如果你仍然遇到问题，最好的方法是与实验室同事、导师或其他在使用Triton X-114的研究人员交流，以获得更多的经验和指导。在实验中，确保遵循正确的操作步骤，并进行必要的实验控制，以确保获得准确的结果。

chenzhen2016[使用道具]
三级
Rank: 3

UID 440604
精华 0
积分 261
帖子 261
信誉分 0
可用分 1026
专家分 0
阅读权限 255
注册 2023-6-8
状态离线

发表于 2023-8-18 16:17 资料个人空间短消息加为好友

小中大

Triton X-114是一种非离子表面活性剂，可用于膜蛋白的提取和富集。它在低温下与水相混溶，在高温下则会形成两相体系，其中一个相是富含去污剂的有机相，另一个相是富含水的水相。这种相变特性是由于Triton X-114的亲水性和疏水性部分的不同引起的。当在高温下形成两相体系后，膜蛋白会在两相的界面上分配，从而实现富集。

如果你在37°C水浴下使用Triton X-114没有观察到相变和相分离，可能有以下一些可能的原因：

1. Triton X-114质量问题：首先要确保你使用的Triton X-114是优质的，没有受到污染或分解。使用新鲜的、密封良好的Triton X-114试剂。

2. 水相和有机相的浓度： Triton X-114的相分离取决于其浓度。确保你的溶液中Triton X-114的浓度足够高以触发相变。一般来说，相变浓度通常在15-20%之间。

3. 混合不均匀：在高温下混合样品时，确保混合是均匀的，以确保Triton X-114充分与膜蛋白接触，促进相分离。

4. 离心条件：当样品在高温下与Triton X-114混合后，离心条件对于相分离的成功也很重要。确保使用适当的离心参数（速度、时间等）以实现相分离。

如果你已经尝试了以上步骤但仍然没有观察到相分离，可能需要仔细检查每个步骤是否正确操作，确保溶液的质量和浓度是合适的。如果问题仍然存在，你可以考虑咨询实验室同事或导师，或者尝试不同的提取方法来寻找更适合的方案。

28 3/3 ‹‹1 2 3