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标题:【求助】大家看看，我这图，是不是核酸干扰啊

greenbee[使用道具]
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发表于 2013-10-17 15:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


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原帖由 11_hjx 于 2013-10-17 15:19 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')


恩，非常感谢啊，你说的V字形，是不是说，就是底部有点尖的样子呢》》？就是整个泳道，下面比较尖，是这样的吗？

不是，如果样品里含有DNA的话，条带会出现V字形的趋势，DNA含量少的话会中间稍微向下尖，含量越多往下尖的越严重~~
注意我说的是条带，不是泳道，条带跟泳道不是一个概念的……
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发表于 2013-10-17 15:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


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原帖由 greenbee 于 2013-10-17 15:21 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')


不是，如果样品里含有DNA的话，条带会出现V字形的趋势，DNA含量少的话会中间稍微向下尖，含量越多往下尖的越严重~~
注意我说的是条带，不是泳道，条带跟泳道不是一个概念的…… ...


恩，明白了，就是说，条带不是平的，而是呈现“笑脸”状，非常感谢啊，你看我中间那个样品，出现拖尾，而且有点模糊，大侠觉得这是什么原因造成的 啊？？
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发表于 2013-10-17 15:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


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原帖由 11_hjx 于 2013-10-17 15:21 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')


恩，明白了，就是说，条带不是平的，而是呈现“笑脸”状，非常感谢啊，你看我中间那个样品，出现拖尾，而且有点模糊，大侠觉得这是什么原因造成的 啊？？ ...


里面有细颗粒状沉淀，所以出现拖尾；
条带呈现波浪状，可能你的样品里盐离子浓度过高；还有一点就是电泳缓冲液可能离子浓度也有点高，可以检查一下配方……
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发表于 2013-10-17 15:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


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原帖由 greenbee 于 2013-10-17 15:22 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')


里面有细颗粒状沉淀，所以出现拖尾；
条带呈现波浪状，可能你的样品里盐离子浓度过高；还有一点就是电泳缓冲液可能离子浓度也有点高，可以检查一下配方…… ...

你好，这个颗粒状沉淀，是不是蛋白沉底啊？？盐离子浓度高，我这个牛肉蛋白，也需要除盐吗？？
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发表于 2013-10-17 15:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

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原帖由 11_hjx 于 2013-10-17 15:28 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')


你好，这个颗粒状沉淀，是不是蛋白沉底啊？？盐离子浓度高，我这个牛肉蛋白，也需要除盐吗？？

是蛋白的沉淀，但不是蛋白沉底，就是你变性的时候由于高温，还原剂被氧化，起不到应有的还原作用，蛋白质不能完全去折叠，仍然聚集在一起(这里可能我解释的不太明白，你可以查一下上样缓冲液里还原剂的作用是什么)，从你的上样口也可以看出，的确有再氧化存在，颗粒沉淀就是这么来的；
至于盐离子浓度，跟你什么蛋白没关，是你用的裂解液可能含盐离子过高，或者你再做别的处理，比如透析或者层析什么的操作而使得盐离子浓度过高；不过这只是怀疑，还是首先建议你检查一下你的电泳缓冲液配方~~
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发表于 2013-10-17 15:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
重新跑了次，顶端那絮状的东西，是不是也是蛋白沉淀啊 ，这个有没有什么方法来解决啊？？


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发表于 2013-10-17 15:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

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原帖由 11_hjx 于 2013-10-17 15:31 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
重新跑了次，顶端那絮状的东西，是不是也是蛋白沉淀啊 ，这个有没有什么方法来解决啊？？

应该是你的蛋白变性有问题，尤其是左起第4道~~
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发表于 2013-10-17 15:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

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原帖由 greenbee 于 2013-10-17 15:33 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')


应该是你的蛋白变性有问题，尤其是左起第4道~~

你好，大侠在不？我又提蛋白跑了次，请帮忙看看，有哪些不足啊，这个是要上双向的！！你说的那个“鬼影”貌似还在啊，你们跑得时候都能很好的出去吗？？请指教啊 ！！


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发表于 2013-10-17 15:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

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原帖由 11_hjx 于 2013-10-17 15:34 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')


你好，大侠在不？我又提蛋白跑了次，请帮忙看看，有哪些不足啊，这个是要上双向的！！你说的那个“鬼影”貌似还在啊，你们跑得时候都能很好的出去吗？？请指教啊 ！！ ...

有时候也会偶尔出现，很久没做了，没太在意了~~
其实从图上看，这张电泳图除了上样孔处看似有沉积之外，其余还都挺好的了，不知道变型用的是什么还原剂，推荐你用DTT，而且双向电泳本身也推荐用DTT做还原剂~~
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发表于 2013-10-17 15:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

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原帖由 greenbee 于 2013-10-17 15:35 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')


有时候也会偶尔出现，很久没做了，没太在意了~~
其实从图上看，这张电泳图除了上样孔处看似有沉积之外，其余还都挺好的了，不知道变型用的是什么还原剂，推荐你用DTT，而且双向电泳本身也推荐用DTT做还原剂~~ ...

恩，谢谢啊 ，是用的DTT呢！！
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