蛋白质与蛋白组学

严重同意蛋白的重要性,actin的WB正常，并不代表sample合格。
我上个月做WB做了半个月，目的条带就是出不来。后来改做ACTIN，很容易条带就出来了。但换回目的蛋白的一抗还是出不来。开始怀疑是一抗的问题，换了一瓶一抗仍没有效果。后来同一个膜同时跑了 actin和目的蛋白，同样是actin条带出的很好，目的蛋白出不来。
后来考虑是sample的问题，重新提取了蛋白,用同样的方法做，目的蛋白很明显就出来。
所以，actin能出来，并不代表sample里的蛋白没有降解，尤其是目的蛋白含量不高的时候。

===========================================================================================================

我做的是磷酸化的STAT3，活化后应该都往细胞核里跑了，但我提的是细胞总蛋白，做了之后目的条带没出来，actin是有的，是不是一定要提核蛋白才行呀，还是p-stat3 本身丰度就太低了呀，求救ing！~

我感觉膜的处理和转膜的电压选择很重要。
我第一次做时，我的目的蛋白53kDa，实验室的technician给我的protocol中转膜条件是23v 30min。结果转完后一看胶上的marker条带还很清楚，后来我查了资料，改为80v 60min，效果很好。

我用的膜是PVDF膜，第2次做时没用methanol处理，结果膜上有一片透明的区域，当时不知为什么，后来在园里咨询了后才知道是没处理的原因，后来每次都用methanol浸泡2-5min，然后浸在转移夜里直到用时，效果很好。

贴张图大家看看区别。