小中大
楼主提议不错，浏览一下，收获不小。
本人也有些经验以供分享：
楼上好多提议作WB最重要的是提高蛋白浓度，偶颇有同感，但也有例外。首先要看你实验目的，如果作2D或者低丰度蛋白就必须尽量提高蛋白浓度，一般组织可以达到30ug/ul,细胞可以到10ug/ul（本人经验）。
其次看你作的蛋白的需求量，如果仅需要10ug左右，就不要搞很高的浓度，因为定量时稀释倍数太大，结果就会很差。同时上样量太少误差就很明显。把上样体积定在10－20ul最好。
我做细胞比较多，收集了一些裂解细胞的方法，仅供参考：
1) 全细胞裂解液150mmol/L NaCl, 1mmol/L EGTA, 50mmol/L Tris-HCl（pH 7.4）, 1%NP-40, 0.5μg/ml Leupeptin, 0.7μg/ml Pepstatin A, 50μg/ml PMSF， 2.2μg/ml Aprotinin。
在4℃条件下，按5×106个细胞加100ul含有蛋白酶抑制剂的细胞裂解液，蛋白酶抑制剂用前临时加入。在冰上反应30min后，4℃，12000r/min离心10min收集上清，-80℃保存备用。
2）胞浆蛋白、胞核蛋白抽提裂解液及操作步骤：
a)胞浆蛋白抽提液：10 mM HEPES (PH7.8), 15 mMKCl, 10% N P-40, 0.1mM EDTA , 1 mM DTT, 1 mM MgCl2，使用前加蛋白酶抑制剂终浓度为100μg/ml PMSF, 2.35μg/ml aprotinin, and 5μg/ml leupeptin，0.7μg/ml。4℃储存。
b)胞核裂解液：20mM HEPES （7.9）,10mM KCl , 1mM EDTA,1mM EGTA,1mM DTT, 20 mM NaF, 1 mM Na4P2O7,1 mMNa3VO4, 420mM NaCl, 20%glycerol, 使用前加100μg/ml PMSF, 2.35μg/ml aprotinin, and 5μg/ml leupeptin，0.7μg/ml。4℃储存
c)蛋白抽提：细胞5x l06，用PBS(PH7.2)洗1次，以下在冰上操作。弃上清，加入100-150μl胞浆裂解液，混悬，冰上肿胀15min，再剧烈震荡涡动10s。10000g，离心20s(4o)：仔细吸取全部上清，为胞浆蛋白-80o保存备用。沉淀加核蛋白裂解液50-100μl混悬，冰浴30min，间以搅拌。12000g，5min取上清分装，为胞核蛋白-80o保存备用。
