蛋白质与蛋白组学 » 讨论区 » 经验共享 » 【求助】超滤和过滤技术答疑园地:有问尽管来提

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标题:【求助】超滤和过滤技术答疑园地:有问尽管来提

xueyouzhang[使用道具]
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发表于 2013-10-25 19:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

LZ你好，我想把我通过胃蛋白酶切好的F(ab)2和Fc fragments分开，但是比较微量，40ug溶在500ulPBS中，请问可以用怎么样规格的超滤管去除Fc并浓缩？谢谢！
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发表于 2013-10-25 19:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

如何正确理解水通量的概念?谢谢
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luoliqiong[使用道具]
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发表于 2013-10-25 19:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

LZ你好。我想既然是膜分离技术，必然有一定的膜吸附残留，我做过一些蛋白和多糖的超滤和透析，感觉残留损失很大。请对如何避免膜吸附残留损失指点一二。谢谢
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发表于 2013-10-25 19:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我想分离两个蛋白，分别大小为22和45kd左右，目标是纯化22kd的，请问我要用多大孔径的膜？

========================================================================================

这2个蛋白很难通过膜分开，因为分子量差异不大。
在开题附件的文件中已经说过，该技术不大适合蛋白分级分离(Fractionation)，尤其是分子量差异不大的2中蛋白。
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发表于 2013-10-25 19:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 xueyouzhang 于 2013-10-25 19:56 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

LZ你好，我想把我通过胃蛋白酶切好的F(ab)2和Fc fragments分开，但是比较微量，40ug溶在500ulPBS中，请问可以用怎么样规格的超滤管去除Fc并浓缩？谢谢！

你的挑战有2个：
1， 分子量的差异。抗体的Fab段和Fc段分子量大小差异大不大？分别是多少？知道了才好选择哪种孔径的膜；
2， 成分微量。对于500ul体积的样品浓縮是有超滤管的，浓縮应该没有问题。
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发表于 2013-10-25 19:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 greenbee 于 2013-10-25 19:56 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

如何正确理解水通量的概念?谢谢

水通量Flux，是指在一定的温度（比如说25摄氏度）和一定的压力下（比如说1Bar），单位面积的膜单位时间（一般一小时计）透过的水的量。
Flux= XX LMH@25C*1Bar

注意水通量有新膜水通量和恢复水通量。前者是第一次使用前的新膜测定得出的水通量，这个数值测定后作为该膜用后清洗恢复率的水通量标准。恢复水通量是指用过的膜经过清洗之后，测定膜的水通量，并计算恢复百分比。一般该百分比不能小于80%。
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发表于 2013-10-25 19:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 luoliqiong 于 2013-10-25 19:56 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

LZ你好。我想既然是膜分离技术，必然有一定的膜吸附残留，我做过一些蛋白和多糖的超滤和透析，感觉残留损失很大。请对如何避免膜吸附残留损失指点一二。谢谢 ...

一下几点需要考虑：
1， 膜的材质；
2， 蛋白浓度的选择；不宜太浓，
3， 缓冲体系的pH选择，尽可能选择膜吸附小的环境--需要找条件；
4， 离心力（速度）和离心时间的考虑；
5， 回收样品时候的细致--尽可能全面回收；
认真处理好这些问题，应该可以得到理想的结果。
祝您成功！
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发表于 2013-10-25 19:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

楼主你好。
请问超滤管可以用来浓缩病毒吗？我在做慢病毒包装，需要对培养基浓缩来提高病毒滴度。本来最好是用超速离心法来浓缩，实验室没有超速离心机，有人在网上说可以用超滤法来浓缩，不知道楼主有没有相关的经验？谢谢
。
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发表于 2013-10-25 20:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

如何制备浓度较稀的血浆？是不是用pbs相应的稀释一下就可以？还有其他的方法？请指教！
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bluelake[使用道具]
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发表于 2013-10-25 20:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
:LZ你好，我想把我通过胃蛋白酶切好的F(ab)2和Fc fragments分开，但是比较微量，40ug溶在500ulPBS中，请问可以用怎么样规格的超滤管去除Fc并浓缩？谢谢！

===============================================================================================================

你的挑战有2个：1， 分子量的差异。抗体的Fab段和Fc段分子量大小差异大不大？分别是多少？知道了才好选择哪种孔径的膜；2， 成分微量。对于500ul体积的样品浓縮是有超滤管的，浓縮应该没有问题。
F（ab'）2是110kd,Fc已经被切成了几个Kd的小片段,而不是50Kd的整段。
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