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标题:【求助】超滤和过滤技术答疑园地:有问尽管来提

ROSE李[使用道具]
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发表于 2013-10-25 20:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

软骨细胞培养过滤需要用多少目的筛网？
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发表于 2013-10-25 20:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

1请问四种糖：A(分子量666)，B（分子量504），C（分子量342），D180.想得到高纯度的A，应该选用何种型号。
2请问三种糖：B（分子量504），C（分子量342），D（分子量180）.想得到高纯度的B，应该选用何种型号。
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发表于 2013-10-25 20:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
楼主你好。
请问超滤管可以用来浓缩病毒吗？我在做慢病毒包装，需要对培养基浓缩来提高病毒滴度。本来最好是用超速离心法来浓缩，实验室没有超速离心机，有人在网上说可以用超滤法来浓缩，不知道楼主有没有相关的经验？谢谢
。

==============================================================================================================

当然可以。
给您说个故事，由于超滤膜可以浓缩病毒，美国鬼子为了避免恐怖组织用超滤膜做生物武器，所以要求购买超滤膜产品时申请出口许可证，申请时需要提供足够的证据证明该产品是用于民用，而非军事用途。由于超滤离心的膜面积比较小，弄不成大气候，所以没有要求申请。一般大的膜产品就需要申请了。
这种申请不仅限于美国产品，也包括日本鬼子，德国鬼子等的类似产品。
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发表于 2013-10-25 20:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
如何制备浓度较稀的血浆？是不是用pbs相应的稀释一下就可以？还有其他的方法？请指教！

==================================================

可以。注意保持等渗/等张。当然其他缓冲液也可以，比如Tris。
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发表于 2013-10-25 20:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你的挑战有2个：1， 分子量的差异。抗体的Fab段和Fc段分子量大小差异大不大？分别是多少？知道了才好选择哪种孔径的膜；2， 成分微量。对于500ul体积的样品浓縮是有超滤管的，浓縮应该没有问题。
F（ab'）2是110kd,Fc已经被切成了几个Kd的小片段,而不是50Kd的整段。

==================================================================

您用SPIN X UF500试试。分子量可以选择30KD或者10KD.
FC段越小越好，对于分开越重要。注意可以加缓冲液多次洗滤，利于FC段的透过。
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发表于 2013-10-25 20:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
1请问四种糖：A(分子量666)，B（分子量504），C（分子量342），D180.想得到高纯度的A，应该选用何种型号。
2请问三种糖：B（分子量504），C（分子量342），D（分子量180）.想得到高纯度的B，应该选用何种型号。

=====================================================================

很抱歉，您的几种物质分子量都是同一个数量级，Log MW=2,xxxx,所以无法用该法分离。
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发表于 2013-10-25 20:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
软骨细胞培养过滤需要用多少目的筛网？

===========================================

一般说来180~200目可以用。相当于孔径75~85um。
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caihong[使用道具]
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发表于 2013-10-25 20:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
当然可以。
给您说个故事，由于超滤膜可以浓缩病毒，美国鬼子为了避免恐怖组织用超滤膜做生物武器，所以要求购买超滤膜产品时申请出口许可证，申请时需要提供足够的证据证明该产品是用于民用，而非军事用途。由于超滤离心的膜面积比较小，弄不成大气候，所以没有要求申请。一般大的膜产品就需要申请了。
这种申请不仅限于美国产品，也包括日本鬼子，德国鬼子等的类似产品。

=========================================================

再请问选用分子量Cutoff多少的超滤膜能保证浓缩的质量并且兼顾速度？
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发表于 2013-10-25 20:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 caihong 于 2013-10-25 20:04 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
当然可以。
给您说个故事，由于超滤膜可以浓缩病毒，美国鬼子为了避免恐怖组织用超滤膜做生物武器，所以要求购买超滤膜产品时申请出口许可证，申请时需要提供足够的证据证明该产品是用于民用，而非军事用途。由于超滤离心的膜 ...

一般地，选择膜的孔径大小: 目标蛋白分子量=3~6倍 膜孔MWCO。
这样能够保证浓縮的回收率高。球形蛋白偏向于3倍。椭圆形，长条形蛋白需要6倍或者更多。
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caihong[使用道具]
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发表于 2013-10-25 20:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 njkph 于 2013-10-25 20:05 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')


一般地，选择膜的孔径大小: 目标蛋白分子量=3~6倍 膜孔MWCO。
这样能够保证浓縮的回收率高。球形蛋白偏向于3倍。椭圆形，长条形蛋白需要6倍或者更多。 ...

谢谢楼主。我的这个问题问的不清楚。我是想问如果我用超滤管来浓缩慢病毒，选择多大MWCO的比较合适？
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