蛋白质与蛋白组学 » 讨论区 » 经验共享 » 【求助】超滤和过滤技术答疑园地:有问尽管来提

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标题:【求助】超滤和过滤技术答疑园地:有问尽管来提

yes4[使用道具]
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发表于 2013-10-25 20:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请问对于MWCO 100K的超滤膜，用于浓缩病毒培养液，但是病毒培养液中含有5%的蔗糖，如果浓缩10倍体积的话，由于蔗糖分子量远远小于100K，这样最终的浓缩液中蔗糖的含量是否有变化，而且培养液中含有酚红，酚红的含量是否有变化？
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发表于 2013-10-25 20:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 yes4 于 2013-10-25 20:07 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

请问对于MWCO 100K的超滤膜，用于浓缩病毒培养液，但是病毒培养液中含有5%的蔗糖，如果浓缩10倍体积的话，由于蔗糖分子量远远小于100K，这样最终的浓缩液中蔗糖的含量是否有变化，而且培养液中含有酚红，酚红的含量是否有变化？ ...

理论上说，100K的膜对于小分子的蔗糖和酚红是全部穿透的，所以浓度应该保持不变。但是实际的情况是和蔗糖以及酚红的穿膜动力学常数有关，动力学过程决定浓縮液中小分子成分的含量。如果穿膜的动力学常数和水近似的话，则含量基本无变化，如果有差异，则浓度稍微偏高。
理论上，浓縮只是对于大分子而言（相对于膜孔）。对于小分子不存在浓縮效应。
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发表于 2013-10-25 20:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谢谢楼主。我的这个问题问的不清楚。我是想问如果我用超滤管来浓缩慢病毒，选择多大MWCO的比较合适？

=============================================================================

抱歉没有看到该问题。
病毒都是纳米级别的，小至二十纳米，大到几百纳米。按照分子量计算，怎么也得1000k以上。
所以不管是那种病毒，用100K或者300K浓缩，都是安全的，不会有损失的。
您可以试试。
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发表于 2013-10-25 20:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

您好！我想再问一下，既然不同物质的穿膜动力学常数不同，那么水的穿膜动力学常数应该是最大的吧，是否有一些常用化学生物物质的穿膜动力学常数表。如果病毒收获液中加入人白（分子量大约66KDa），那么使用300K的超滤膜浓缩十倍后，人白的浓度如何变化？谢谢！
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发表于 2013-10-25 20:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 @STAR@ 于 2013-10-25 20:08 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

您好！我想再问一下，既然不同物质的穿膜动力学常数不同，那么水的穿膜动力学常数应该是最大的吧，是否有一些常用化学生物物质的穿膜动力学常数表。如果病毒收获液中加入人白（分子量大约66KDa），那么使用300K的超滤膜浓缩十倍后 ...

据我所知，目前没有该常数表。
300K膜孔之于66k蛋白，接近5倍。理论上会有比较小的浓缩效应，即上游浓度稍大于下游浓度，具体数据需要试验检验。您可以实际测定看看。
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发表于 2013-10-25 20:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 njkph 于 2013-10-25 20:09 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')


据我所知，目前没有该常数表。
300K膜孔之于66k蛋白，接近5倍。理论上会有比较小的浓缩效应，即上游浓度稍大于下游浓度，具体数据需要试验检验。您可以实际测定看看。 ...

因为66k蛋白是300k膜孔的1/5，理论上是应该基本进入膜下液被除去，在膜上浓缩液中浓度会比以前降低吧? 是否正确，请指正。
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发表于 2013-10-25 20:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

LZ好，感谢开此话题，从中学习到很多东西！
想问一下：1、买的Spin-X 8162的过滤管，上面是0.45um，这个应该不可以作为超滤管用吧？从理论上讲的话，一般WB用的硝酸纤维素膜也是0.45um的，蛋白也一般不会转过头，所以就问一下，谢谢！
2、有没有截留蛋白大小与孔径大小的那种对应关系？
3、超滤管最大的承受离心力为多大？是不是都不能超过6000rpm？
4、超滤管使用前需不需要做什么处理？用后如果再重复使用的话，有没有什么保存的注意事项？
5、买的milipore的15ml超滤管，截留分子10KDa，但是从浓缩的结果来看，总觉得损失好多，不知道是残留在膜上的太多，还是有滤出去的？
谢谢楼主！辛苦了！期待您的指点！
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发表于 2013-10-25 20:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

谢谢楼主的介绍和经验。
两个问题：
1，分子量和膜孔径的关系，你给出一个蛋白的粗约估计，90kd/1nm，不知有无出处？我们用激光动态光散射仪，DLS ( dynamic light scattering)，测得单链抗体分子量约42kd，分子直径约3nm; 90kd的约为4nm.
2. 微滤膜和超滤膜的清洗，也就是如何重复使用。一是这些滤器贵但质量不错，值得重复使用；二是环保，减少塑料垃圾。当然厂家不会高兴，你越浪费他们越高兴。广州一家公司说是可以提供专用清洗液，号称微孔滤器可重复使用十次以上，也不知真假。不知楼主有无经验？
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发表于 2013-10-25 20:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
因为66k蛋白是300k膜孔的1/5，理论上是应该基本进入膜下液被除去，在膜上浓缩液中浓度会比以前降低吧? 是否正确，请指正。

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这样说不正确。如果你使用缓冲液反复洗滤，浓缩后的白蛋白浓度可能会低于浓缩前（同洗滤的液体量及次数有关）。要是没有洗滤的过程，水分子还是会比白蛋白更容易通过滤膜。
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nn255[使用道具]
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发表于 2013-10-25 20:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你好。我想请问下问题。我现在用超滤管直接浓缩我的水稻根系分泌物中的蛋白样品，对于其中所含的糖类以及一些小分子盐类能不能都除去？还有，超滤到最后一般要按什么比例进行洗滤，是不是洗的多了会损失蛋白？ 如果我只是用水溶解蛋白的话，会不会造成蛋白凝集？谢谢啦。
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