蛋白质与蛋白组学

不知道有没有用过Millipore或者Sartoris的半自动超滤系统，关于整个系统的死体积，我以前只是知道死体积越小越好，不知道有没有具体的一个指标来规范整个死体积，比如多大面积的膜包对应的整个系统的死体积必须小于多少才算合格？

非常感谢

============================================================================================================

不知 道 你说的 是 哪个型号？可否提供。

关于死体积问题，以下几点供参考：

1，死体积并不是所有的工艺都那么关注。比如我们在脱盐的时候，更换缓冲液的时候。我们在必须关注的地方给与考虑，那么如何考虑？

2，死体积主要是管路连接，阀门连接，压力表三通连接进出口连接泵连接粗细长短导致。膜包 本身死体积并不大。
3，对于特定的工艺，我们要求死体积最好不要大于多少，是我们使用者的要求，至于是否做到，看厂家的设计。
4，厂家可以通过对于上述2的条件进行设计，一般可以达到理想结果。但是也有极端的案例。
5，如果我们要的是浓缩端的料液，那么可以在超滤结束时候用空气顶出来，再少量清洗下。
6，如果我们要的是透过液，损失是在所难免的。

综合以上条件，再和厂家题要求，基本能够满足。

只是理论上可以，参照供应商关于30kd的定义，可以发现它是没法分离22kd和45kd蛋白的。

==================================

您说的对的。

我建议还是可以用离心管试验下。方便快捷。

楼主的专业知识让人佩服！

我想请教两个问题，关于过滤和微滤的。

1、猪肝研磨后的悬浆不离心只过滤，大体应该使用什么设备和怎样设计步骤呢？
几年前我研发这个猪肝提取RNA项目，过滤就是一个重大阻碍。猪肝研磨后一些粗大的组织很容易去除，到了5μm级别就很难过滤了。借用别人的三足式离心过滤机效果也一般。我们的考虑是不购买大容量离心机，所以只能单纯考虑过滤方案。

2、蛇毒蛋白溶液经2300g离心后再过0.45μm滤膜，用抽滤瓶负压过滤，需要频繁换膜且速度很慢。是不是可以加一些助滤剂帮助过滤呢，还是在离心步骤之前加一些能帮助小颗粒沉淀的物质？
最终目的就是要缩短整个离心、过滤的时间而且损失的蛋白要少。

谢谢关注
祝顺

===============================================================================================================

关于您的问题，我认为不妨试验一下方法
1、如果想对动物组织匀浆只过滤不离心，使用中空纤维切向流过滤系统应该是比较好的一个选择。中空纤维是开放式的泳道，不容易堵塞，比较适合用在一些高固形物含量样品的浓缩上。
2、蛇毒样品室粘度比较高的一类样品，如果您每次处理的样品想对比较多的话，我个人觉得您可以应用中空纤维过滤；另外如果你的蛇毒样品可以稀释的话，可以稀释以后过滤，然后再浓缩，这样就会容易过滤一些。

PVDF 和PES两种材料对蛋白质的吸附量是有差异的，因此适宜过滤的液体性质也是有差异的。一般来说，PVDF对蛋白质的吸附量更低，更多用在比较珍贵的蛋白质产品的除菌过滤上；PES材料对蛋白质吸附稍微多一些，而且很多厂家的PES材质的滤膜是多层渐变孔径的膜（就是说上层孔径大，下层孔径小），这样的滤膜更适合过滤一些比较“脏”的液体。

===========================================

谢谢楼主
那么请问这两种材料在脂肪酸的滤过上是否有差异呢?

PVDF 和PES两种材料对蛋白质的吸附量是有差异的，因此适宜过滤的液体性质也是有差异的。一般来说，PVDF对蛋白质的吸附量更低，更多用在比较珍贵的蛋白质产品的除菌过滤上；PES材料对蛋白质吸附稍微多一些，而且很多厂家的PES材质的滤膜是多层渐变孔径的膜（就是说上层孔径大，下层孔径小），这样的滤膜更适合过滤一些比较“脏”的液体。

===============================================================================================================

谢谢楼主
那么请问这两种材料在脂肪酸的滤过上是否有差异呢?
PES材质的膜属于水系膜，不适合过滤有机溶剂，PVDF材质的有些膜产品是水系膜，也有PVDF有机膜专门由于有机试剂的过滤，建议你购买有机系顾虑膜过滤你的脂肪酸。

楼主 我样品3000 k ，用10000k 的超滤 但是取下清，跑小肽 总是没有东西 什么原因。。。 多谢

==============================================================================================================

根据超滤膜选择的原理，让样品透过超滤膜需要选择的膜孔径是分子量大小的5-10倍大，也就是说你需要选择15-30k超滤膜，30k超滤膜有产品，你可以试一试。