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标题:【求助】多糖纯化后醇沉无沉淀

=pkchen=[使用道具]
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原帖由 jiushikeshui371 于 2013-10-25 20:48 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')


苯酚硫酸发实验的手法对结果测定影响较大,但不会是阴性和阳性的差别。如果有45%的含糖量,应该没有问题。
萘酚硫酸法测定时加入浓硫酸后不能震摇,只要发现液面交界处有紫色环就是阳性,不需要紫外扫描。

如果你超滤后多 ...

硫酸苯酚和萘酚法的操作是正确的,应该不是手法问题。我的粗提物是棕黄色的,会不会是颜色干扰呢?不过我超滤的滤出液也是黄色,苯酚硫酸法就没有颜色反应。
我现在只要一处理,之后醇沉就没有沉淀。
是不是醇沉没有沉淀就说明没有多糖了呀?
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summerxx[使用道具]
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用CTAB试试?
离心一下看看。
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mogu[使用道具]
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我说说我的提取工艺,看对你有帮助没:
脱脂:80%乙醇脱脂后烘干药渣;
药渣称重后按照1:10加水煮3h,煮三次后,浓缩到1g:10ml的浓度后加入乙醇到醇含量为80%后于室温静置,隔夜可见明显分层。(其实加乙醇的时候就能有絮状沉淀,边加乙醇边搅动)
醇沉5次或者三次,脱蛋白采用氯仿正丁醇,外加蛋白酶,脱完后紫外全波长扫描检验效率。
苯酚硫酸法不行的话就采用萘酚法,不要摇,糖颜色会有比较明显色环;
但是一般的糖里面会有小分子的糖干扰,含量往往是不准确的。特别是粗提物,我看见一个帖子里面提到有个换算因子,但是我还没用找到怎么换算。
脱色的话,有篇文献提到不要采用活性炭,双氧水等方法,实际中,除非大量采用树脂,少量可以采用纤维素凝聚来实现脱色效果~不采用树脂主要是损耗太大。
希望这些对你实验有帮助~
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=pkchen=[使用道具]
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原帖由 mogu 于 2013-10-25 20:51 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

我说说我的提取工艺,看对你有帮助没:
脱脂:80%乙醇脱脂后烘干药渣;
药渣称重后按照1:10加水煮3h,煮三次后,浓缩到1g:10ml的浓度后加入乙醇到醇含量为80%后于室温静置,隔夜可见明显分层。(其实加乙醇的时候就能有絮状沉淀,边加 ...

谢谢。我也纯化了。用deae-葡聚糖-ff。之前的色素如果去不干净特别伤柱子。我觉得用大孔吸附树脂还是比deae便宜得多。其实脱色我一直也没找到一种行之有效,而且便宜的方法。
我的水提醇沉粗多糖别说紫外了,连双缩脲等化学方法都做了,显示没有蛋白,或是极少量。
我提取的东西里面应该好多多酚黄铜类东西,我就是想把色素尽可能去掉,多糖尽可能提高含量,可是一处理就显示什么都没有了~~不是醇沉沉淀不出来,就是沉淀的东西不溶于水,要不就是溶于水了测不出糖浓度。我一直不知道我究竟是错到哪一步了。都郁闷死了!!!
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BUK[使用道具]
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纤维素凝聚能够重复利用,而且脱色效果是很明显的~何况凝聚能够再生,有条件的话直接上凝聚。
多糖一般脱色必然伴随糖的损失,特别是采用大孔树脂,这个你实验室要是有人做植化,你可以看看大孔树脂一般用在什么时候~
植物多糖里面蛋白含量一般是比较少的,同时采用氯仿正丁醇方法脱蛋白,多糖损失可达40%左右,但是一般脱4次依然还有中间层,要是精密测含蛋白量,就用生化的凯氏定氮法,但是我觉得不用这么复杂,因为在后续纯化过程中蛋白是越来越少的。
之前脱色素,有人采用石油醚脱色素,要是你的药物中糖分少的话就用它吧~效果还是比较好的~
脱完色素的药渣算产率要按照原始重量算~
一处理就没有了,就换换,一般多糖是水溶的,至少溶于热水。醇沉的时候把握好水提夜的浓度,太稀的话浪费酒精,而且沉淀也很慢~注意好比例再试试~醇沉3次后多糖颜色会较淡~真空干燥和冻干的颜色差别较大。
查查看你的药物里面含糖量有人做过没~有,是多少;没有,看看它的功效或者再找文献。
测不出糖浓度,看看是不是其他干扰,比如试剂问题,苯酚有没有问题,仪器问题~有时候出问题不一定是实验本身的问题,再就是实验要淡定~不要急躁~
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PINK[使用道具]
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不知道你提的什么,但我做过的一些动物多糖,醇沉的时候需要加一些氯化钠才能沉淀下来,不知你这个提取物要不要这样
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原帖由 PINK 于 2013-10-25 20:53 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

不知道你提的什么,但我做过的一些动物多糖,醇沉的时候需要加一些氯化钠才能沉淀下来,不知你这个提取物要不要这样

谢谢~~现在问题已经解决了,原来不是以沉淀的形式沉淀的~~而是要过滤一下,用滤膜,结果乙醇虑下去的接近于无色了,而应该有的沉淀就堆在滤膜上。
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PINK[使用道具]
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原帖由 =pkchen= 于 2013-10-25 20:55 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')


谢谢~~现在问题已经解决了,原来不是以沉淀的形式沉淀的~~而是要过滤一下,用滤膜,结果乙醇虑下去的接近于无色了,而应该有的沉淀就堆在滤膜上。 ...

那可能是你的多糖太少了,沉淀不明显
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cbou876[使用道具]
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我也想请教一下 我多糖用是水提,然后用让含醇量达到80%沉淀,沉淀很多,然后将沉淀用适当的水溶解,基本可以完全溶解 但是溶解后水溶液是浑浊的,就是混悬液,然后我用(氯仿-正丁醇)的方法去除蛋白,再用让含醇量达到80%沉淀多糖,结果溶液完全澄清,如何摇晃都是澄清的,我想请教下楼主,我看你说的,你滤过就发现有了,你是用的什么滤膜了?你溶液是否在过滤前也是澄清透明的了?还有我也想用大孔树脂脱色,你觉得效果如何?非常感谢
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原帖由 cbou876 于 2013-10-25 20:56 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

我也想请教一下 我多糖用是水提,然后用让含醇量达到80%沉淀,沉淀很多,然后将沉淀用适当的水溶解,基本可以完全溶解 但是溶解后水溶液是浑浊的,就是混悬液,然后我用(氯仿-正丁醇)的方法去除蛋白,再用让含醇量达到80%沉淀多糖,结 ...

我就用0.45的滤膜,是可拆卸的那种,不是滤器,所以可以回收。我过滤前也是澄清的,看不出沉淀。大孔吸附树脂我觉得效果不是很好,去除色素不是很多,而且它是按照极性去除色素的,你要注意你的多糖的极性,还有你想要得到什么极性的多糖。
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