蛋白质与蛋白组学 » 讨论区 » 经验共享 » 【求助】DH10Bac 感受态制备

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴

标题:【求助】DH10Bac 感受态制备

云端ing[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 73234
精华 1
积分 194
帖子 103
信誉分 102
可用分 1251
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-9-20
状态 离线
11
 

Dh10ac里面有Bacmids和helper,必须加卡那霉素和四环素,不然Bacmids或者helper丢失后期转染会失败,少加一种都会导致不转染
顶部
云端ing[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 73234
精华 1
积分 194
帖子 103
信誉分 102
可用分 1251
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-9-20
状态 离线
12
 
Gentamicin 终浓度7微克每毫升
Tetracycline终浓度10微克每毫升
顶部
生物小白mm[使用道具]
一级
Rank: 1


UID 341573
精华 0
积分 1
帖子 2
信誉分 0
可用分 10
专家分 0
阅读权限 255
注册 2022-2-28
状态 离线
13
 
我准备制备DH10的感受态细胞,但是我在培养基里加了四环素和卡那霉素后菌摇不起来,请问这是什么原因导致的啊
顶部
生物小白mm[使用道具]
一级
Rank: 1


UID 341573
精华 0
积分 1
帖子 2
信誉分 0
可用分 10
专家分 0
阅读权限 255
注册 2022-2-28
状态 离线
14
 
我准备制备DH10的感受态细胞,但是我在培养基里加了四环素和卡那霉素后菌摇不起来,请问这是什么原因导致的啊
顶部
chenzhen2016[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 440604
精华 0
积分 261
帖子 261
信誉分 0
可用分 1026
专家分 0
阅读权限 255
注册 2023-6-8
状态 离线
15
 
在DH10Bac感受态制备过程中,需要添加一种特定的抗生素——tetracycline(四环素)。

具体操作步骤如下:

在感受态培养基中添加适量的tetracycline(四环素)抗生素,通常浓度为10-20 μg/mL。
向含有DH10Bac细胞和Bacmid DNA的感受态细胞培养基中添加该抗生素。
进行感受态培养条件下的培养和孵育。
添加tetracycline抗生素的目的是选择性地抑制非重组体(未成功插入转基因DNA的细胞)的生长,从而增加重组体(已成功插入转基因DNA的细胞)的比例。

需要注意的是,具体的抗生素浓度可能会因实验条件、实验目的或实验方案的不同而有所变化。因此,在使用DH10Bac系统进行感受态制备之前,建议参考相关的文献、协议或厂家提供的指南,以获取准确的抗生素浓度和使用方法。https://dgsupera100.com/
顶部