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标题:【求助】跨膜蛋白的原核表达

changlhsyo[使用道具]
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发表于 2013-10-27 17:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

是否分泌到上清或胞周质
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rxcc33[使用道具]
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发表于 2013-10-27 17:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我做的就是膜蛋白的表达,我的蛋白有12次跨膜,用遍所有的原核表达体系都没能将其的成熟肽表达出来,后来选了最大的胞外区片段用pGEX-4T-2在BL21(DE3)coden plus宿主菌中才表达,而且我也遇到空载体在BL21中不表达.只在CP-RP中表达.还有pMAL也是很好的表达体系,我的基因这套系统也表达了
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发表于 2013-10-27 17:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
不知有没有人把几个非跨膜区的亲水部分连成一个多肽进行表达然后制备抗体呢？
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发表于 2013-10-27 17:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我以前表达过一个120kd的跨膜蛋白，跨膜区在N端，约在全长的1/4处，表达出来的蛋白必须添加表面活性剂才能可溶。而且我的 这个蛋白本来就来自原核。

你的空载体都不表达gst，肯定是有问题的，换个载体看看，我也遇到过pGEX载体序列突变的情况。多试几个载体，东方不亮西方亮。

你的基因如果来自真核，最好用带有稀有密码子的宿主菌，如BL21（DE3）codon plus，或者rosseta系列，这两个原理一样，只是不同公司的产品，我的 基因有的用普通的BL21（DE3）不能表达，用coden plus就能表达，而且表达量很高。

最好同时做一个去掉跨膜区的试验，这样更保险。
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yysr238[使用道具]
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发表于 2013-10-27 17:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我想咨询一下，你们表达跨膜蛋白全蛋白用的什么原核表达载体和宿主菌呀！我也出现过上面的情况，用PET-32a和PGEX-4T-2表达载体都没有表达出来！
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