蛋白质与蛋白组学

1、相同的包涵体样品做过其他方式的复性试验吗，如透析，稀释，G25换液？
2、蛋白收率如何？除去那一小部分早期融化的液体，余下的主要样品部分怎么办？

个人认为此方法只是利用了变性剂在低温环境下溶解度较低，除去变性剂而已。相同样品如果用这种方法做可以复性的话，那么用稀释法应该也是可以完成复性的。

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稀释法的缺点就是样品后来体积大。

楼主的方案除了低温去除变性剂外，还有一个作用恐怕就是利用低温固化蛋白质的互相作用和碰撞接触，降低复性过程中因蛋白互相粘合形成的沉淀

也会有点的，但是应该不多，所以提到了用预冷的缓冲液稀释一下防止干扰。

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楼主有做过试验么？液体中残留的尿素大概在多少摩尔

稀释法的缺点就是样品后来体积大。

楼主的方案除了低温去除变性剂外，还有一个作用恐怕就是利用低温固化蛋白质的互相作用和碰撞接触，降低复性过程中因蛋白互相粘合形成的沉淀

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恐怕不是固化。“我做的复性仪能直接析出变性盐而不明显冻结试剂”

我猜测是利用低温，但不是很低温条件，可能是在0到-5度左右，Urea、盐酸胍高浓度的变性剂由于温度下降而析出。为了防止溶液冻结，还可能加入了一些盐类，如NaCl，或甘油之类防冻剂。

透析复性的缺点是不均匀，透析袋壁处的变性剂浓度变化太快。
稀释复性也有浓度变化太快问题，另外体积也是太大。
这个冷冻法如果控制好温度的变化，好像可以均匀地控制变性剂的析出，且样品溶液均一性好。
不管这项技术是否真的能够实现，操作方面也不一定比透析、稀释好（温度控制，常规的试验室没有精确低温控制设备），但思路方面是可以试一试的。

发张麻省联系信函的截图，以证所言！

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我想看的不是这张图。
我想看的是电泳图。虽然我知道复性得到的蛋白质浓度可能很低，但是应该浓缩一下，测一下浓度，做个电泳。
另外，我有个问题，您说"早期融化的液体，其中就应该有已经复性的蛋白"，这个“早期”是多早？多少体积算早期？

楼主有做过试验么？液体中残留的尿素大概在多少摩尔

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我冻过8M的尿素溶液，冰块架在滤纸漏斗上室温融化的结果是下图。很抱歉，没称重估算溶液里面剩余的尿素。您自己有条件估算一下吧！