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标题:【讨论帖】冷冻复性

wanglaoshi[使用道具]
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'就是变性完了冻结,然后抽取早期融化的液体'

Because the urea would have lower solubility at 0 C than in RT, this principle behind this, is likely the same as the 'rapid dilution' or 'step-wise dilution'.
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寻梅[使用道具]
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'就是变性完了冻结,然后抽取早期融化的液体'

Because the urea would have lower solubility at 0 C than in RT, this principle behind this, is likely the same as the 'rapid dilution' or 'step-wise dilution'.

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都是降低变性盐的浓度,不过自觉冷析出更“安定”一些……
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hyuu[使用道具]
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帮楼主顶下。

是个不错的idea,值得进一步尝试。

复性率?能否放大?背后的机制?这些都是很值得研究的问题。

祝楼主早日成功。
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xueyouzhang[使用道具]
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在下问一个比较弱智的问题,假如把要复性的变性液冷冻成冰球颗粒(要是达到纳米级的话更好),那么放到复性液中,会不会提高复性的效率,呵呵,无知无畏,因为我是外行,但现在负责基因工程干扰素的项目,虽然看了很多资料,但都似懂非懂,让各位见笑了。(主要被楼主启发,结合我们在复性的过程中,好多老师告诉我要逐滴加入,并且时间要慢,但实际操作起来会差别很大)
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junhun[使用道具]
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干扰素的复性我也做过,没什么特别好的方法,效率不高-我们是中试级别的。

实际上,复性是个很难的问题。低温本身对蛋白而言就是一个极大的伤害(可能并非全部)。

做复性的人会去想很多的替代方法,主要原因是原始的方法效率低,另外,太累人。

这个领域柱上复性前几年比较热,但貌似也没有放大。
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在下问一个比较弱智的问题,假如把要复性的变性液冷冻成冰球颗粒(要是达到纳米级的话更好),那么放到复性液中,会不会提高复性的效率,呵呵,无知无畏,因为我是外行,但现在负责基因工程干扰素的项目,虽然看了很多资料,但都似懂非懂,让各位见笑了。(主要被楼主启发,结合我们在复性的过程中,好多老师告诉我要逐滴加入,并且时间要慢,但实际操作起来会差别很大)

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只要您去思考就有您思考的价值,应该没有真正懂得思考价值的人去取笑您!至于其他人,愿意笑就随他们好了。

您的方法应该也是有价值的,只是后续回收和先期的纳米冰粒产生都会比较麻烦。个人认为基本应该还是迅速稀释方法的变形。而稀释法最大的麻烦也就是最终体积变得太大。
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寻梅[使用道具]
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QUOTE:
原帖由 junhun 于 2013-11-5 23:44 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

干扰素的复性我也做过,没什么特别好的方法,效率不高-我们是中试级别的。

实际上,复性是个很难的问题。低温本身对蛋白而言就是一个极大的伤害(可能并非全部)。

做复性的人会去想很多的替代方法,主要原因是原始的方法效率 ...

低温本身对蛋白而言就是一个极大的伤害(可能并非全部)。-------在目前来说,冻结肯定是有伤害的,之前我一直没想通的也就是这个冻结如何解决。最后发现很简单,答案就是上面我询问的那个尿素做融雪剂的“临界温度”。只要把底面的温度维持在这个临界温度应该就有很好的结果出现。尿素会析出,同时由于尿素的存在又能保证水不冻结。这个温度大约应该在零下22度左右,只要溶液不冻结,这个温度对目前多数蛋白造成的损伤应该是可以忽略的。
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