蛋白质与蛋白组学 » 讨论区 » 经验共享 » 【求助】空肠、回肠、胰腺的β-actin表不表达？

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标题:【求助】空肠、回肠、胰腺的β-actin表不表达？

boom[使用道具]
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发表于 2013-11-6 11:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 boom 于 2013-11-6 11:27 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')


楼楼您好，是western检测到的吗？ 我查看b-actin说明书貌似有说心肌和骨骼肌不能用b-actin作内参，请问你用的哪个型号哪个公司的b-actin,产品
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...

那我也不知道怎么提高了，不过有时候抗体浓度过高或者是样品丰度太高是也会出现条带消失的情况，因为二抗消耗底物的速度太快，根本等不到曝光就已经萃灭了，我们实验室以前碰到过这种情况。
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发表于 2013-11-6 11:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
楼楼您好，是western检测到的吗？ 我查看b-actin说明书貌似有说心肌和骨骼肌不能用b-actin作内参，请问你用的哪个型号哪个公司的b-actin,产品

===============================================================================

客气了，我做的是western blot啊，文献上的图片也是WB的啊。我用的是个国产的一个公司的，北京

京天成生物技术公司，这个公司老板是我导师的师弟，呵呵，当时我就用他公司给我的试用装用的，很好用
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发表于 2013-11-6 11:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
楼上您好，我一抗和二抗比例均是1:2000.上样按50ug计算的
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zwsyrt[使用道具]
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发表于 2013-11-6 11:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

一抗换成1：5000，二抗换成1:10000，上10ug试试
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发表于 2013-11-6 11:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

楼楼，您给我彻底搞迷糊了，可否发一份贵公司的b-actin说明书，我组内是用的cell singal的
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wood533[使用道具]
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发表于 2013-11-6 11:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
一抗换成1：5000，二抗换成1:10000，上10ug试试

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您这个比例都超出抗体说明书的范围了。。
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发表于 2013-11-6 11:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

尽信书，不如无书。我觉得没有什么原则性问题。因为这个是内参蛋白，量非常大
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发表于 2013-11-6 11:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

貌似并不是所有的组织都有b-actin表达，照您这么说，我 举个不恰当的例子，作为医生，我可以不顾 禁忌症和药物有效剂量随便开药吗
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boom[使用道具]
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发表于 2013-11-6 11:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

楼楼若想说服我，请拿出可靠的依据，谢谢！
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zwsyrt[使用道具]
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发表于 2013-11-6 11:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

当然不是你说的那种情况了，我是根据组织的目的蛋白丰度来决定抗体比例和上样 量得。你这种质疑的精神还是不错的，当然有时候还是需要结合实际情况，实践出真知。祝你实验顺利
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