小中大关于血的确实不好分离,况且还是加内标物 的。我刚才看了你的流动相,很少人把乙腈跟甲醇配比然后跟水一起用的吧。你要么选择乙腈跟水,要么选择甲醇跟水配比,直接用水应该也不行,得弄个缓冲液,比如说磷酸一类的,具体的哪一种缓冲液,浓度为多少得看你实验需求。流动相设置一个梯度,这样更利于分离。还有,你进样前有没过滤膜?这个很关键哦。
至于那个检测波长,我以前做实验前查的文献中,所用的检测波长不一,你这方法经过改造的,也不能照搬人家所用的波长,建议你拿到紫外分光那边做个全波长扫描,比较好的吸收波长一目了然。