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标题:[已解决]不做同位素标记,但用D20溶解,能否检测出样品中的物质

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Erica2088wr[使用道具]
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500MHz 指的是氢核的频率,这台一起如果做碳谱的话,频率是125MHz左右,如果做氘核的话约是500/6 MHz
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amelican_beauty[使用道具]
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QUOTE:
原帖由 以诺-约瑟 于 2010-6-9 14:14 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
各位好,我要通过测定底物和产物的含量变化,来确定一个酶反应是否发生。
资料上写着反应后将体系冻干,就是去除水分,然后用D2O溶解,再做NMR分析。但没有提及反应底物是否做同位素标记。
我想问一下:
(1)底物不做同位素标记,只将 ...

用氘代试剂溶解样品是为了用于核磁锁场,锁场是采集核磁谱图的前提,所以必须采用氘代试剂将样品溶解,才能进行核磁测试。溶解后可以做氢谱,也可以做碳谱,这个看个人需要了。楼主的样品估计是蛋白质类物质吧,一般来讲,蛋白质物质在氘代水中测不出活泼氢的信号,比如一些氨基,羧基氢等,所以没有办法积分定量得到产物和底物的相对含量。我们做的时候往往用氘代水和水的混合溶剂,混合比例一般为 90/10,这样可以保持锁场,然后做压水峰实验,就能得到样品中所有氢的信号。楼主也可以做碳谱,然后积分求各个组分的含量,但是有的碳谱积分是没有意义的,不能反映真实的信号比例,这个得问问老师,定量碳谱用哪种方法,如果我没记错的话,好像定量碳谱得用门控去耦的方法才能对碳谱定量,楼主还是多问问做测试的老师吧,呵呵。
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