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标题:【讨论帖】朊病毒

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最新的一篇文章:

致病性朊病毒蛋白必须与正常朊病毒蛋白同时存在才可致病,故

Hypothesis:正常朊病毒蛋白也参与了致病中枢神经的过程

基本方法:将单抗与正常朊病毒蛋白做 crosslink,打入C57BL/10 鼠的海马内,免疫组化,荧光染色,观察组织变化。
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我这又一张prpC转变为prpSc的图片,和大家分享!


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"Prion是一分子量为33kD~ 35kD的糖蛋白,Prion蛋白(prion protein,Prp)由 254个氨基酸组成(人类Prp为253个氨基酸)。研究发现,Prp存在异构体,既Prpc和Prpsc。Prpc是存在于正常组织的功能还不清楚的糖蛋白,对蛋白酶敏感,不致病,Prpsc分子量为27kD一30kD,对蛋白酶有抗性,是可致病蛋白质。"
這樣說是不太準確的,由于prpc和prpsc的一級結搆是完全一樣的,所以它們的分子量也應該是一緻的
prp27-30的産生是由于prpsc隻是部分地抗蛋白酶K的消化 其N耑的柔軟捲麯(prp23-90)被降解后産生的大約142個aa殘基就是prp27-30

Prions
STANLEY B. PRUSINER†
Departments of Neurology and of Biochemistry and Biophysics, University of California, San Francisco, CA 94143


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现在有很多针对PrP的抗体是不能区分两种不同的PrP(PrPC和 PrPSc)的,我手头看到的一篇文章说单抗15B3可以特异性识别PrPSc(Korth C, Stierli B, Streit P, Moser M, Schaller O, Fischer R, Schulz-Schaeffer W, Kretzschmar H, Raeber A, Braun U, Ehrensperger F, Hornemann S, Glockshuber R, Riek R, Billeter M, Wuthrich K, Oesch B. Prion (PrPSc)-specific epitope defined by a monoclonal antibody. Nature, 1997, 390(6655): 74-77)。
要判断是PrPC还是 PrPSc,其实可以利用PrPC和 PrPSc对PK(蛋白酶K)的不同抗性来区别,PrPC是不能抵抗PK的消化的,而PrPSc则可以部分抵抗,再利用抗PrP抗体来捕捉,判断是否有留下的PrP片断就可以知道是PrPC还是 PrPSc了。

=============================================================================================================

Antibody to DNA detects scrapie but not normal prion protein
Communicated by Lynn T. Landmesser, Case Western Reserve University, Cleveland, OH, November 25, 2003 (received for review June 10, 2003)

A conformational change is
believed to convert the normal cellular prion protein into PrPSc.
Detection of PrPSc for diagnosis and prophylaxis is impaired because
available Abs recognizing epitopes on PrP fail to distinguish
between PrPSc and normal cellular prion protein. Here, we report
that an anti-DNA Ab, OCD4, as well as gene 5 protein, a well
established DNA-binding protein, capture PrP from brains affected
by prion diseases in both humans and animals but not from
unaffected controls. OCD4 appears to immunoreact with DNA (or
a DNA-associated molecule) that forms a conformation-dependent
complex with PrP in prion diseases. Whereas PrP immunocaptured
by OCD4 is largely protease-resistant, a fraction of it remains
protease-sensitive. Moreover, OCD4 detects disease-associated PrP
>10 times more efficiently than a widely used Ab to PrP. Our
finding that anti-DNA Abs and gene 5 protein specifically target
disease-associated DNA–PrP complexes in a wide variety of species
and disease phenotypes opens new avenues in the study and
diagnosis of prion diseases.


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不同抗體識別位點


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“人PRNP的突变常发生在第32、48、56、72位密码子处,多为重复片段的插入或点突变,突变的结果是使Prpc分子转变成Prpsc”

這些是prp八肽重復區的突變 一般認為它們會影響prp跟Cu2+的結閤
而在prp的緻密domain區域 有很多點突變跟傢族性的prion疾病相關
這些點突變被認為直接影響暸prpc到prpsc的conversion
所以 研究遺傳性點突變蛋白是研究prp蛋白性質的一個非常重要的手段


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這張似乎好一些


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使用計算機糢擬的手段 糢擬低Ph條件誘導的倉鼠PrPD147N從prpc到prpsc
的轉變
From conversion to aggregation: Protofibril formation of the prion protein
PNAS  February 24, 2004  vol. 101  no. 8  2293–2298


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糢擬的prpsc多聚體的形成


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