【求助】能否在一个表达载体里插入两个蛋白实现同时表达 - 经验共享

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标题:【求助】能否在一个表达载体里插入两个蛋白实现同时表达

101010[使用道具]
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发表于 2013-11-15 21:13 资料个人空间短消息加为好友

小中大

多顺反子看来应该是这样的

启动子--操纵子--RBS--目的基因1---终止子---RBS--目的基因2---终止子---RBS---终止子---目的基因3--终止子

RNA聚合酶识别启动子启动转录，生成mRNA，然后核糖体识别mRNA的RBS区，启动翻译基因，然后到达第一个终止子的时候，停止翻译，但是翻译结束后，后面还有RBS区，就使得核糖体没有马上脱落，开始了下一段的翻译

101010[使用道具]
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发表于 2013-11-15 21:14 资料个人空间短消息加为好友

小中大

启动子--操纵子--RBS--目的基因1---终止密码子---RBS--目的基因2---终止密码子---RBS--- ---目的基因3--终止密码子---polyA

=========================================================================================================

谢谢，谢谢

那复制子是从ORI开始到什么结束？

以上面的多顺反子为例
阅读框就是：“启动子--操纵子--RBS--目的基因1---终止密码子---RBS--目的基因2---终止密码子---RBS--- ---目的基因3--终止密码子---polyA”

ORF就是：启动子--操纵子--RBS--目的基因1---终止密码子

jujuba[使用道具]
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发表于 2013-11-15 21:15 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 101010 于 2013-11-15 21:14 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
启动子--操纵子--RBS--目的基因1---终止密码子---RBS--目的基因2---终止密码子---RBS--- ---目的基因3--终止密码子---polyA

=================================================================================== ...

这里laboy的理解可能有个非常严重的错误，ORF不应该包括启动子、操纵子、RBS；启动子之后的序列可能称为转录框比较合适，转录子发生剪切之后才形成阅读框编码的蛋白质。

另外，“RBS--目的基因1---终止密码子---RBS--目的基因2---终止密码子---RBS--- ---目的基因3--终止密码子”模式似乎也不应适用于原核生物，尤其是作者提到顺反子（顺反子是不是只能用于原核生物的概念？），个人理解是否应该是RBS序列不需要反复出现？而用于原核表达的话，甚至是不应该携带？因为基因来源的细菌是到另一个宿主表达，转而应该用宿主的识别表达系统而非原来的识别表达系统？

举例来说，目标基因：“RBS--P启动子--起始密码子--目的基因1---终止密码子---间隔序列1--起始密码子--目的基因2---终止密码子---间隔序列2--起始密码子--目的基因3---终止密码子”，如果我要做目标基因1，2，3的表达供研究之用，那么我是否只需直接克隆“---起始密码子--目的基因1---终止密码子---间隔序列1--起始密码子--目的基因2---终止密码子---间隔序列2--起始密码子--目的基因3---终止密码子”，然后连接到载体导入宿主菌表达就OK了？因为载体上应该携带表达所需的附件“RBS--P启动子--”？

需要说明的是间隔序列可以是RBS也可以不是？因为我看到过间隔序列只有一个碱基的！

以上观点仅供讨论，谢谢你们的讨论，收益良多，欢迎继续交流探讨。

Ao7[使用道具]
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发表于 2013-11-15 21:16 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我也想知道第一段基因的终止子与第二段基因的RBS 之间有没什么序列的要求

idoww[使用道具]
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发表于 2013-11-15 21:17 资料个人空间短消息加为好友

小中大

是个好地方！我觉得在一个载体上同时表达2个蛋白是完全可以的，就看你怎么构建这个表达载体了！

vtongli[使用道具]
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发表于 2013-11-15 21:18 资料个人空间短消息加为好友

小中大

谢谢，谢谢

那复制子是从ORI开始到什么结束？

以上面的多顺反子为例
阅读框就是：“启动子--操纵子--RBS--目的基因1---终止密码子---RBS--目的基因2---终止密码子---RBS--- ---目的基因3--终止密码子---polyA”

ORF就是：启动子--操纵子--RBS--目的基因1---终止密码子

===============================================================================================================

阅读框ORF是起始密码子开始，终止密码子结束的编码某个蛋白AA的一段序列，这里终止子和终止密码子要区别开来，两个是不同的东东。上面的多顺反子根据Novgen的共表达载体图谱，我的理解是这样的。
启动子--操纵子--RBS--目的基因1ORF---间隔序列---RBS--目的基因2ORF---间隔序列---RBS---目的基因3ORF---终止子

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