小中大我所说的一个表达框,包括启动子、终止子、读码框等:)嘿嘿。。得包含完整的表达元件。不过真核生物不是用的RBS,AUG的有效起始需要的是Kozak序列。
2段蛋白分别构建到同一个载体上,共转染293是可以实现共表达的,因为:在瞬转的情况下,基因不需要复制即可表达;在稳转的情况下,基因可以同时整合到基因组中,同样可以共表达。
而在大肠杆菌中,大肠杆菌分裂很快,质粒如果不能在大肠杆菌中复制,会在培养的过程中迅速丢失。如果需要两个质粒分别携带不同基因转化后共表达,需要两种质粒都稳定复制。因此这两个质粒属于不同的不相容群,携带不同的抗生素,则可以在双抗生素压力下实现共表达。当然也有人将同一不相容群的不同抗性的质粒转化大肠杆菌,同时使用两种抗生素的压力维持两种质粒的存在而实现共表达。
============================================================================================================
长见识了
传送门
-------------------
Kozak序列--一个重要的名词
Kozak序列, 名词, 三元, 转录, GTP
Kozak sequence
KOZAK是一个女科学家,她研究过起始密码子ATG周边碱基定点突变后对转录和翻译所造成的影响,并总结出在真核生物中,起始密码子两端序列为:——G/N-C /N-C/N-ANNATGG——,如GCCACCATGG、GCCATGATGG时,转录和翻译效率最高,特别是-3位的A对翻译效率非常重要。该序列被后人称为Kozak序列,并被应用于表达载体的构建中。
(在真核起始过程中,由Met-tRNAi,eIF-2和GTP形成了三元复合体(ternary complex)再结合40S小亚基形成前起始复合物(preinitiation complex)。此复合物的形成分为二步:首先GTP和eIF-2结合,以增加此因子与Met-tRNA.结合的效率。然后三元复合体再与40S亚基结合。核糖体结合位点由起始密码子所决定,在某些起始密码子上游邻接序列也可能十分重要,被称为Kozak序列(ACCAUGG),它相当于原核的S-D序列。前起始复合物结合5′7meG帽结构并沿着mRNA扫描,借助Kozak序列搜寻第一个起始密码子。)
所谓Kozak规则,即第一个ATG侧翼序列的碱基分布所满足的统计规律,若将第一个ATG中的碱基A,T,G分别标为1,2,3位,则Kozak规则可描述如下:
(1) 第4位的偏好碱基为G;
(2)ATG的5’端约15bp范围的侧翼序列内不含碱基T;
(3)在-3,-6和-9位置,G是偏好碱基;
(4)除-3,-6和-9位,在整个侧翼序列区,C是偏好碱基。
Kozak规则是基于已知数据的统计结果,不见得必须全部满足,一般来说,满足前两项即可。
KOZAK写的那篇关于KOZAK序列的文献:
文献名字:Compilation and analysis of sequences upstream from the translational start site in eukaryotic mRNAs
作者:Marilyn Kozak