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标题:【讨论帖】于蛋白电泳问题总结

sunnyB[使用道具]
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含盐量可能太高了!
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fqswdzd[使用道具]
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应该不是,因为前几次条带在积层胶压成一条线,而且现在是所有的样品都这样。同时问一下,如果是样品含盐多,应该怎么办?
同时问一下,同实验室的兄弟现在跑电泳时总是成波浪形,将胶用我的液体配,电泳液重新配过,且现在电泳液只用一次,情况好一些,但是仍存在,不知该怎么办?
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sunnyB[使用道具]
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同时问一下,同实验室的兄弟现在跑电泳时总是成波浪形,将胶用我的液体配,电泳液重新配过,且现在电泳液只用一次,情况好一些,但是仍存在,不知该怎么办?

是否所做的胶的底部不平,呈锯齿状?如果是这样,跑的蛋白条带就是呈波浪形。我们用的是bio-rad垂直电泳槽,做胶时垫在玻璃板下的那块垫子一定要干燥,起码要搽干,否则做出的胶就是这样。
一起共勉!
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fqswdzd[使用道具]
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谢谢各位的关心。现在电泳的情况好些,可能是浓缩胶的长度不够,另外同实验室兄弟的电泳条带仍不很理想,现在用60V电压慢跑好些。但是最近我做的磷酸化蛋白一直没结果,连非特异性条带都没有,我现在是严格按照说明书做的。各位有何高见。
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小野花[使用道具]
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我没有见过bio-rad的说明书,我的师姐教我做胶的时候,总是让我把垫片用水湿润一下,理由是不容易漏胶。这样做的胶片跑胶后,也没有波浪型。
另外我想问一下,是不是天气太热了,胶凝固的质量不会是太好?
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我觉得有时候电泳的问题很难讲的。建议最好重新配制分离胶buffer和电极buffer。
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你好,你提的问题不是很清楚,你跑蛋白电泳是做blot还是考染?蛋白电泳条带弥散可能有以下几个问题:
1。样品上样量比较大,12%的胶,蛋白超过40微克条带肯定会弥散,但这不会影响各种蛋白质的分离,我曾上样超过100微克,转膜后条带很清晰。
2。2×的SDS上样缓冲液中的DTT容易失效,可以临时补加,不放心可以重配。也要保证其它溶液没有配错。
3。蛋白裂解时超声或抽吸要充分,尽量减少不容性蛋白。
4。条带成波浪型有可能是分离胶凝固的不均匀,灌分离胶时一定要快,不要担心会有气泡,只要用异丙醇封顶,气泡就会消失。
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c86v[使用道具]
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封顶最好用饱和正丁醇,异丙醇和水互溶
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ladyhuahua[使用道具]
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建议把制好的胶在4度放一晚再电泳; 也可能需要更换电泳系统。
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tie8[使用道具]
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1.电压、电流。
2.上槽液用时间长。
3.样品高盐。
4.点样孔塌胶。
5.分离胶浓度不正确。
6.样品有糖基化位点。
7.样品缓冲液发生沉淀或结晶
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