小中大你好,你提的问题不是很清楚,你跑蛋白电泳是做blot还是考染?蛋白电泳条带弥散可能有以下几个问题:
1。样品上样量比较大,12%的胶,蛋白超过40微克条带肯定会弥散,但这不会影响各种蛋白质的分离,我曾上样超过100微克,转膜后条带很清晰。
2。2×的SDS上样缓冲液中的DTT容易失效,可以临时补加,不放心可以重配。也要保证其它溶液没有配错。
3。蛋白裂解时超声或抽吸要充分,尽量减少不容性蛋白。
4。条带成波浪型有可能是分离胶凝固的不均匀,灌分离胶时一定要快,不要担心会有气泡,只要用异丙醇封顶,气泡就会消失。