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标题:【讨论帖】于蛋白电泳问题总结

mysmdbl[使用道具]
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发表于 2013-11-16 22:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
那就是看看沉淀有没有啊？很久不见拉！
换载体咯！
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fqswdzd[使用道具]
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发表于 2013-11-16 22:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
沉淀有,上清没有.用了3个载体pet28,30,32统统不行.我这个蛋白是植物中的一个酶,定位在细胞膜上,是否可能会在表达后与大肠杆菌的膜结合被沉淀那?
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fqswdzd[使用道具]
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发表于 2013-11-16 22:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
如果上样缓冲液不能溶解包含体，12000rpm离心后包含体不就会到了沉淀里吗？这样上样后跑的不就是可溶性蛋白了？
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fqswdzd[使用道具]
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发表于 2013-11-16 22:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

上样缓冲液中的SDS能够溶解包涵体，有关于用SDS进行变性研究的，只是因为SDS与蛋白形成络合物，在复性中不容易去除，所以一般不用。我以前做的几个包涵体用1%的SDS就可以溶解，2乘SDS上样BUFFER中含的SDS为4%。另外上样BUFFER中的DDT或2-巯基乙醇可以打开蛋白的二硫键，使蛋白变性。如果你超声后的上清中不存在目的蛋白，沉淀中有，就证实你表达的蛋白是包涵体，改变条件或摸索复性吧！
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发表于 2013-11-16 22:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
这是我自己干的胶，用扫描仪扫描很好用奥


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发表于 2013-11-16 22:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

楼主辛苦了。请问有没有什么软件可以分析每个泳道蛋白含量及纯度？
先谢过了！
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