蛋白质与蛋白组学 » 讨论区 » 经验共享 » 【讨论帖】于蛋白电泳问题总结

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 538  6/54 |‹‹‹45678910111213›››|
 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴
打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:【讨论帖】于蛋白电泳问题总结

fqswdzd[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 77226
精华 1
积分 295
帖子 285
信誉分 102
可用分 2181
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-11-15
状态 离线
51

发表于 2013-11-16 11:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
六、SDS-PAGE求助高手


本人在做SDS电泳，发现电泳结果显示的蛋白带比我原来估计的要少了很多，不知是啥原因，那位高手可以解释一下，会不会有蛋白丢失的现象！！！
急！！！。
顶部
66+77[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 75637
精华 1
积分 596
帖子 785
信誉分 103
可用分 4751
专家分 20
阅读权限 255
注册 2011-10-26
状态 离线
52

发表于 2013-11-16 11:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

marker正常，你的电泳就没问题，问题在你的样品上
顶部
windy+++[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 74130
精华 0
积分 490
帖子 720
信誉分 100
可用分 4343
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-6
状态 离线
53

发表于 2013-11-16 11:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我曾经出现过MARKER条带少两条的情况，至于蛋白质条带没有显现的情况也遇到过，我想首先要保证你的样品中包含蛋白质，如果的确有，那么可能是蛋白质浓度不够高。我把MARKER的浓度增加一倍后，每个条带都显现出来了，试试看加大蛋白浓度。
顶部
zranqi_1[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 77471
精华 0
积分 409
帖子 497
信誉分 100
可用分 3298
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-17
状态 离线
54

发表于 2013-11-16 11:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 fqswdzd 于 2013-11-16 11:21 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
六、SDS-PAGE求助高手


本人在做SDS电泳，发现电泳结果显示的蛋白带比我原来估计的要少了很多，不知是啥原因，那位高手可以解释一下，会不会有蛋白丢失的现象！！！
急！！！。 ...

提供几种可能：
1、蛋白已降解。
2、胶浓度是否合适。
3、样品是否完全溶解，并且进入泳道。
4、染色是否确定无误。
5、上样量的问题。
顶部
ha111[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 72969
精华 0
积分 821
帖子 1239
信誉分 101
可用分 7048
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-9-16
状态 离线
55

发表于 2013-11-16 11:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

可能是你胶的浓度小了。
顶部
shenkunjie[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 76942
精华 0
积分 712
帖子 1124
信誉分 100
可用分 6420
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-11
状态 离线
56

发表于 2013-11-16 11:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我也说两句，结合自己的经验
1、胶的浓度是不是合适，因为有的胶如8%得胶，小分子全跑没了，marker肯定要少。
2、转膜时间够不够，如转膜时间不够，有的条带还没有转上去，转的时间太长，marker可能丢了（这种情况少）。建议不转，用考马斯亮蓝染，就知道有几条带了。
3.蛋白丢失可能性不大，不过不排除降解的可能。
顶部
fqswdzd[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 77226
精华 1
积分 295
帖子 285
信誉分 102
可用分 2181
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-11-15
状态 离线
57

发表于 2013-11-16 11:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
七、关于SDS电泳脱色的一种快速有效方法！

PAGE胶染色完毕后，如果用一般的甲醇－乙酸脱色液进行脱色，一般至少需要2－3h，但是我们实验室一般都利用蒸馏水煮的方法：
1.先将500ml蒸馏水放在一个干净的烧杯中，在电炉上煮沸。
2.将染色好的胶用DD水冲净后放入煮沸的蒸馏水中，煮3～5min。
3.将DD水倒掉，看胶是否已经脱净，如果还不好，可以用少量水再煮一次。
一般整个脱色过程最多15min即可搞定！
各位可以试试，可以避免每次脱色时搞得到处都是醋酸味！
顶部
flower-201[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 74055
精华 0
积分 443
帖子 605
信誉分 100
可用分 3785
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-4
状态 离线
58

发表于 2013-11-16 11:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

相关疾病：
普通感冒
我是用乙醇-乙酸配成的脱色液,胶放入后微波加热10秒钟至微热,上摇床,10分钟后,倒掉,换新的脱色液重复一次,不超过半个小时也好了.关键是不用甲醇了,避免毒性.醋酸倒没什么,还防感冒呢
顶部
remenb[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 75236
精华 0
积分 631
帖子 941
信誉分 100
可用分 5531
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-20
状态 离线
59

发表于 2013-11-16 11:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

那你的配方是什么
顶部
fqswdzd[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 77226
精华 1
积分 295
帖子 285
信誉分 102
可用分 2181
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-11-15
状态 离线
60

发表于 2013-11-16 11:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 remenb 于 2013-11-16 11:25 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

那你的配方是什么

乙酸：乙醇：水=1：2：7
顶部
 538  6/54 |‹‹‹45678910111213›››|