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标题:【讨论帖】于蛋白电泳问题总结

INK[使用道具]
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发表于 2013-11-16 11:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
用高温煮对你蛋白不会有影响吗？
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qianqin1977[使用道具]
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发表于 2013-11-16 11:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我们是直接用脱色液加热到60度左右,摇10min中,再换过新的脱色液同意超作.效果不错呀.
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yychen[使用道具]
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发表于 2013-11-16 11:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

关于“用高温煮对你蛋白不会有影响吗？ ”

蛋白上样之前已经煮过了，所谓死猪不怕开水烫。

而且SDSPAGE就是变性的条件。
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ending[使用道具]
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发表于 2013-11-16 11:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
PAGE胶染色完毕后，如果用一般的甲醇－乙酸脱色液进行脱色，一般至少需要2－3h，但是我们实验室一般都利用蒸馏水煮的方法：
1.先将500ml蒸馏水放在一个干净的烧杯中，在电炉上煮沸。
2.将染色好的胶用DD水冲净后放入煮沸的蒸馏水中，煮3～5min。
3.将DD水倒掉，看胶是否已经脱净，如果还不好，可以用少量水再煮一次。
一般整个脱色过程最多15min即可搞定！
各位可以试试，可以避免每次脱色时搞得到处都是醋酸味！

======================

我用过，好象效果不好呀！
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发表于 2013-11-16 11:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

深圳国家生化中心有一种方法，不用醋酸和醇染色脱色，用的是什么我没试过，听说还不错，一点味道都没有，速度也快，感兴趣的不妨去他们网站去看看。我是用醋酸和乙醇脱色，就是电炉上煮，染色和脱色30分钟就可见结果
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68943512yao[使用道具]
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发表于 2013-11-16 11:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
还有人直接放在微波炉里呢
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gogo[使用道具]
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发表于 2013-11-16 11:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我今天试用蒸馏水炮胶，并放在微波炉里加热，效果很好，而且速度快。

前几天我还看到一个有关快速染色的帖子。方法是胶放在染色液里，并在微波炉煮沸，再摇三分钟即可看结果。效果似乎不是很理想，脱色后看到胶染色不均匀。不知道是不是因为染色业放少了，给蒸发了？

另外我想问，用这种快速染色的方法。加热时甲醇，乙酸都已经蒸发了不少，这种染色业是否还可以重复利用。
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birdfish[使用道具]
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发表于 2013-11-16 11:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

加热脱色是比较快。
另外，深圳国家生化中心的网站我去看了，没有发现关于此类帖子呀？
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发表于 2013-11-16 11:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
前几天我还看到一个有关快速染色的帖子。方法是胶放在染色液里，并在微波炉煮沸，再摇三分钟即可看结果。

是不是热染 用的R350啊？

各位酶切的时候用什么脱色啊？本人都是用100mM NH4HCO3脱色，有时候也会放在37度水浴或者超声什么的，但是还是会有些顽固分子脱不掉色，郁闷。。。
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ha111[使用道具]
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发表于 2013-11-16 11:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我用的是R250,这个没什么太大差别，只是染色物质不同而已。

你说的酶切染色是什么意思？我用的这个脱色方法脱色非常完全。
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