小中大嗯，我也是刚接触蛋白晶体，我也想请教cutetfriend站友，如果真核生物的蛋白带修饰，那能不能将参与修饰的基因切掉来表达呢？我也看到有很多只做蛋白中某个domain的，但就是不知道把糖基化修饰基因切掉会不会行得通！当然这个糖基化修饰基因并不影响酶活！谢谢
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1. 有些蛋白的整體結構不好結晶或者全長序列表達有問題﹐是可以挑選其中的domain來
做。整體蛋白可能會有結構鬆散loop區﹐而這些loop區﹐可能會導致蛋白的homogeneity出
現問題。而domain由于結構剛性穩定﹐則容易結晶。
我做過將膜蛋白的跨膜區去掉後表達﹐並拿到晶體。但這不是loop區的問題。
2. 老實說﹐我碰到的涉及修飾的情況不多。這個可能要你自己多查文獻來看。
我只能有一些簡單未經證實的建議。
據我所知﹐蛋白上糖基有增加水溶性(一些膜蛋白﹐如皮膚上的冷熱感受蛋白)﹐
參與分子識別(如精卵結合)的作用﹐還有血型的分類就是基與血型蛋白上的糖基不
同等。
有個問題﹐你說的參與修飾的基因是指另外的基因﹐還是指基因上的某段序列? 我
暫時理解成一段序列。
如果將糖基化修飾基因切掉﹐可能會影響其水溶性與折疊? 如果在Ecoli中表達﹐估
計形成包涵體的機會大增? 至於這種包涵體是否可復性﹐我不敢說。
如果糖基有別的功能﹐並不影響水溶性與折疊﹐或許可以切掉來嘗試。
或者你可以平行對比地來做﹐一個切﹐一個不切。這樣的工作量應該不會多多少。
你肯定可以通過這樣的嘗試學到很多東西。
另外﹐糖基蛋白即使能結晶﹐最後的結構也是很難看到糖基的﹐因為糖基太柔性可
變了。
希望其他人進一步指點。
