小中大您好,首先我需要说明的是采用ECL化学发光蛋白质印迹实验所得到的结果在很多期刊文献上都被正式采用,化学发光蛋白质印记实验已应用多年,只要是做蛋白表达,功能,相互作用等研究方面的实验室大多数都会采用Western blotting作为一种常规技术手段来验证实验结果.作为这样一项传统,稳定但又不断持续发展的技术,western blotting没有停滞不前,近几年得到了多方面的发展,以袮补传统方法上的一些不足和突破新的应用,如:
1 传统的胶片曝光,现在逐渐被采用冷CCD的凝胶成像系统所取代,从而克服了传统胶片有于定量动态范围窄而导致不能精确定量的缺点.而且CCD可以实时成像,避免了胶片易过曝光导致的过饱和信号.
2 现在最新的就是荧光蛋白质印迹实验,ECL Plex (cy2,cy3,cy5).你也提到 荧光标记具有持续时间长、线性关系好、灵敏度高、可多重检测、系统直接成像等优势，这些都可能促使荧光标记比ECL所得结果更加可靠。确实你已经领悟到荧光蛋白质印迹实验最重要的优势就是卓越的定量效果.为什么定量这么重要?如果用化学发光的结果,虽然实验会加入内参蛋白但由于曝光时间的难于控制,导致定量的系统偏差.这是不可避免的.但荧光的本身的光稳定性,宽线性范围,等保证了蛋白的这种相对定量.所以通过western blotting实验我除了可以知道蛋白是否存在以外,更重要得是可以完成精确定量表达差异的蛋白峰度.
3 所以在此基础上经典的western blotting技术又有了更新的应用领域--2D/DIGE Werstern blotting .即在双向电泳/荧光差异双向电泳 胶图上进行蛋白质印记试验,以前由于化学发光检测灵敏度局限,胶的后染色对杂交印记效率的影响,定量的局限性等,在这方面的应用受到了限制.现在采用了荧光蛋白质印迹实验有了很大的突破,参见附件文献（文件太大， 请发邮到lifesciences@ge.com, 我回复的时候会把附件给你）
或:
QUALITATIVE AND QUANTITATIVE INSIGHTS IN VIRUS HOST-CELL INTERACTIONS
INVESTIGATED WITH DIFFERENTIAL PROTEOMICS, MULTIPLEX WESTERN BLOT AND QUANTITATIVE PCR.
FACK, F., KREMER, J., REVETS, D., PIRROTTE, P., AMMERLAAN, W.,
RENAUT, J. *, MULLER, C. P.
Laboratoire National de Santé - Institute of Immunology, Luxembourg.
*CRP-Gabriel Lippman, EVA, Luxembourg.
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