小中大这个主题开的好，一下学到很多，补充点我们的做法：
试剂准备：我们把APS每0.1g分装在干净的EP管里，临用的时候加1ml水轻轻混匀就可以用了，非常方便，连续使用就放在4°，暂时不做这液体可以冻在-20°，一个月之内问题不大。电泳缓冲液我们也是10X的，转膜缓冲液是2X的，效果很好，一两个月之类都不用调整pH值。WB一抗很重要，我们使用过的santa、abcam、CST、millipore的效价都比较高，用起来反而节约并且放心，其中磷酸化抗体CST的最全，可惜每支抗体量有点少。
做胶：上胶条的时候一定要用梳子将两个底脚刮好，底边不够直问题不大。灌胶有一点点气泡直接用针头挑破就可以了。天冷的是后把胶放在37°温箱，可以节省不少时间。
其它：胶片的确是事先裁好比较好，我们的经验是用干净的裁刀，就是那种杂志什么修边用的一个板子侧面有铡刀。一次可以裁好N张胶片，省时。装在套elisa板子的那种袋子里，外面在罩上密封的文件袋，很安全。暗室里一摸出来就能夹在夹子里曝光。
