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标题:【求助】超声破碎之前是否应加溶菌酶

cwcwcww[使用道具]
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发表于 2013-12-7 16:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

加溶菌酶可以，我就是这样做的。
但要考虑你的蛋白大小，不要和溶菌酶的size相近就行，还有就是溶菌酶不要加的太多。
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ffaa[使用道具]
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发表于 2013-12-7 16:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

在讨论这个问题之前，首先要确定蛋白表达是以包涵体的形式，还是可溶性的。如果是包涵体，细胞破碎后离心收集沉淀。如果是可溶性的，则离心取上清。另外，判断菌体是否完全破碎也没有一个确定的标准；要根据经验自己多摸索。
在超声前不需要加溶菌酶。
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junhun[使用道具]
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发表于 2013-12-7 16:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

加和不加溶菌酶其实对于菌体破碎没有本质上的区别，个人或实验室操作习惯而已，只是在某种程度上提高蛋白的可溶含量，但这个提高率不是很高，如果目的蛋白是以包涵体形式表达，那加了溶菌酶也不太可能弄到上清。
bugbuster个人觉得没有超声破碎效果好，方便时方便，对于小量表达分析是很不错，但只能作为参考，
破碎条件，这个班里有太多的帖子，个人觉得还是要重质不重量，对于我们发文章做点科研的，一点量就够了，所以质最重要，那就是尽量保证蛋白的不降解，迅速，对后面下游的纯化才有意义。
祝好运！
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