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标题:【讨论帖】我在SDS-PAGE中所犯的错误

8s5g[使用道具]
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发表于 2013-12-12 17:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
如果是试剂的问题的话为什么分离胶可以在30分内就可以凝好呢？我APS是配好后分装，拿了一管新的也是一样啊！我想我现在跑胶是有点问题，可到底是什么问题我还不知道，在注意一下拉！
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avi317[使用道具]
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发表于 2013-12-12 17:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

问大家一个问题，我最近跑胶时，发现分离胶下边距离边缘1cm的地方经常出现比较大的气泡状的东西，今天更坏的是下边的分离胶竟然裂开了，而我这次配胶是昨天晚上配的，今天早上用，刚开始并没有气泡产生，过了几个钟头之后才开始出现气泡的，而且溴芬兰遇到气泡后就变成了黄色。我今天加了冷凝水，应该不是温度的事情，请问谁知道该解决这个问题，我已经遇到这个问题不下6，7次了，谢谢！！！
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发表于 2013-12-12 17:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 avi317 于 2013-12-12 17:12 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

问大家一个问题，我最近跑胶时，发现分离胶下边距离边缘1cm的地方经常出现比较大的气泡状的东西，今天更坏的是下边的分离胶竟然裂开了，而我这次配胶是昨天晚上配的，今天早上用，刚开始并没有气泡产生，过了几个钟头之后才开始出 ...

我们曾出现过这种情况，主要因为玻璃板不平或不干净所致，胶凝时会收缩，与玻璃板之间如果结合不紧密的话，那就会出现气泡或者裂开了，你只要换一块板或者好好洗洗，就应该没有问题了
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kswl870[使用道具]
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发表于 2013-12-12 17:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我在铬酸中泡过玻璃板，应该挺干净的，至少比我以前的干净，不过，下次再好好洗洗试试。另外，可能的原因我想是不是ap，我的ap用了好久了，今天我重新配了，到现在为止胶还没裂，因为我现在跑14%的胶，可能ap对他影响比较大。
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发表于 2013-12-12 17:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

大概没有比不拆封胶边条更让人郁闷的了，尤其有一次已经跑了近一个小时。可别忘
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bs4665[使用道具]
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发表于 2013-12-12 17:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我也在做SDS-PAGE 的电泳,使用的是恒压,请教各位一个问题:
电压大小和分离样品的性质关系怎么样?大了好还是小了好啊?

1、当然电压大了，胶跑的快，时间短，分离效果差，所以如果要跑胶的样品蛋白的分子量差别不大的话，要用的电压要小，这样分离效果好；如果分子量差别大的话，就用大电压，可以快速看到结果。
2、菌液样品一般要小电压，因为它的蛋白多，电压大不容易分开
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发表于 2013-12-12 17:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

根据我们实验室的经验。一般使用的是恒流。压缩胶15mA,分离胶30mA.
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发表于 2013-12-12 17:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

还是恒压好，100V
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发表于 2013-12-12 17:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
有个师兄做了块尽一平米的胶，他狂加TEMED与AP，疯狂，不过很有效。 好嘿人哦！
如果有条件，可以用Bio-rad的电泳仪，就不用封了，非常方便。

不过我研究了bio-rad的制胶装置，然后自己做了一个同样的，效果不错哦！
我下面用的是一般的软泡膜，不过上面有一层透明胶，然后用我自制的夹子把两个玻板夹在上面，灌胶，效果完全与bio-rad 的媲美，为什么国内就没人搞过这个了，象6.1那个烂厂，就没有想过人性化吗，十多年了还是老产品。
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caihong[使用道具]
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发表于 2013-12-12 17:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
没有是什么，我要是写下来的错误都可以写好几张纸了
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