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标题:【讨论帖】我在SDS-PAGE中所犯的错误

mimili_901[使用道具]
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发表于 2013-12-12 16:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
1%琼脂粉封边很好用
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wood533[使用道具]
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发表于 2013-12-12 16:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我也是第一次做，我用的是BIO-RAD0.75mm,想请教大家加样时用什么东西加呢？用微量进样器吗？我把tip头前面加了个6号半针头可以伸到孔底，可是一加样就向两侧的孔溢出去，害得我每加一个样都要洗半天旁边的孔：（（
另外跑出来的条带总是有些歪斜，是什么原因呢？好的电泳跑的时候染料带是什么形状呢？
还有我用的12%的分离胶感觉看胶时很容易卷曲，不知道哪里出了问题。
谢谢各位指教啦。

我们用一种特殊的枪头，比10ul的长许多，专门用来加样的。
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tangxin_80[使用道具]
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发表于 2013-12-12 16:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我可能见过的，也是白色的那种，有点像200微升的那么长是吗？
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tangxin_80[使用道具]
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发表于 2013-12-12 16:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
每次跑的时候，电压小点，时间长点，带就不会歪了。
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huifeng0516[使用道具]
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发表于 2013-12-12 16:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
不好意思，请教AP是什么东西的缩写啊？（汗颜）

===========================

Ammonium Persulfate 过硫酸铵
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tangxin_80[使用道具]
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发表于 2013-12-12 16:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
每次跑的时候，电压小点，时间长点，带就不会歪了。

===========================================================

那么请教你们一般电压是多少呢？我是在积层胶用8V/CM,分离胶用15V/CM
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fei1226com[使用道具]
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发表于 2013-12-12 16:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请问我跑2DE时，横纹有点多，大分子蛋白很少，请问有什么解决方法呢，急！
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发表于 2013-12-12 16:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我做SDS-PAGE时用Bio－Rad的电泳槽，一直都很好用。但是用的时间长了有时会出现漏胶的现象。不过总体来说还是很好用的。很方便，但就是价格也很贵。关于AP我看还是现用现配，每次称100mgAP，加1ml水就行了。很麻烦吗？我觉得比拿出来解冻要省时间。其实SDS-PAGE做的好坏关键在于你的样品好坏。还是在制样上多花点心思比较好。至于加样的问题可以用微量进样器，要注意每次用完后洗干净，否则容易堵。有条件的话也可以买专门上样的枪头，200ul的那种，我们实验室有，很好用。
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发表于 2013-12-12 16:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

相关疾病：
头痛
我刚进实验室,近一周做SDS-PAGE时也遇到了头痛的问题:分离胶凝后总是双层,上层大约2mm;跑胶时在染色带前总出现一条很细的条带,不知是何缘故?
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fei1226com[使用道具]
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发表于 2013-12-12 16:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我也遇到同样的问题。我认为这是上层密封液（水或饱和正丁醇）与下层胶的缓冲带，其中也含被稀释的胶液，因此也可聚合，但是因为浓度稀，聚合时间短而无法形成凝胶，只能形成一个折光系数不同的液相。一般我是如此解决，就是当估计下面已经完全聚合时，倒去上层密封用的饱和正丁醇或水，这时，上面那条细带也一起被倒掉了，然后用水冲洗，继续灌制浓缩胶即可。
此处的关键是一定不要聚合过长时间，否则，上面那条细带就也聚合成凝胶，而无法冲洗掉了。
哪位还碰到过这个问题，同时你又是如何解决的，大家一起讨论，看能否找出真正的原因和最佳解决方案。
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