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标题:【讨论帖】我在SDS-PAGE中所犯的错误

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发表于 2013-12-12 16:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
sds比较稳定，一般可以常温保存不会失效，但AP很容易失效，我的经验是将其干粉定量分装于EP管中，固体状态可以长期保存，临用前加入ddH2O溶解就可以了。
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xue258[使用道具]
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发表于 2013-12-12 16:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

若使用用了长时间的系统灌胶，又漏的话：可用封口膜在装好的二玻璃板封口，压紧，就少漏了。
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发表于 2013-12-12 16:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
AP确实需要现配现用，不能存在侥幸心理，我开始做的时候就因为不重视吃了亏；另外我的TEMED（4度保存）和SDS（常温保存，温度低了易结晶，可以放到温箱中溶解）一直用了半年都没有问题；电泳液短期使用没有问题，稀释后使用建议不要超过三次！
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发表于 2013-12-12 16:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
现配的AP可以让胶凝的好一点
而且有时AP潮了也会出现胶不凝

我们用微量加样器，就是50ul的注射器，针头是像细铁丝一样的
很方便
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vivian4123[使用道具]
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发表于 2013-12-12 16:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我们教研室配的10%SDS100ml刚开始溶得很好，不过在室温放置2~3周就出现灰网状物，刚开始怀疑是瓶子不干净，倒掉重配又是这样，不过倒是还能用。不过用的时候让人提心吊胆，大家有解决的好办法吗
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发表于 2013-12-12 16:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我跑SDS－PAGE的时候，会在最两边的加样孔加入等量的纯加样缓冲液。这样可以防止边缘效应使胶比较容易跑齐；而且我加样的时候习惯在MARK后面空一个胶孔，也可以帮助记忆点样的位置的。
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qianqin1977[使用道具]
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发表于 2013-12-12 16:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我用2%琼脂封胶，效果不错，关键是槽内要多到点儿，否则易漏胶。
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hold住[使用道具]
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发表于 2013-12-12 16:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我们教研室配的10%SDS100ml刚开始溶得很好，不过在室温放置2~3周就出现灰网状物，刚开始怀疑是瓶子不干净，倒掉重配又是这样，不过倒是还能用。不过用的时候让人提心吊胆，大家有解决的好办法吗

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换SDS吧（换个厂家的或者换个经销商的），我也遇到过，后来SDS就永远不和那家经销商做了，问题也再没有出现过。
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98776langtao[使用道具]
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发表于 2013-12-12 16:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
蛋白质电泳配的10×TBE母液,使用时用1×TBE时,是不是取一份10×TBE母液,加9份水啊？若用０.5×TBE，是不是取一份母液加１９份水啊？

实在不好意思，太简单的问题
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发表于 2013-12-12 16:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
SDS-PAGE中AP的质量与新旧比较重要，我们一般将其分称于几个EP管中，用时再用ddH2O溶解，一般只用一周左右；

SDS应该不会出现什么问题，放一年左右都没大问题；

电泳缓冲液一般只可用2次，多次重复使用会出现拖尾带
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