生物技术服务

摘要　　用双载体转运凝血VIII因子基因在甲型血友病基因治疗研究中可克服AAV毒载体容量限制， 但存在重链分泌低效和链不均衡性问题。为探索重、轻链间二硫键形成对重链分泌的促进作用， 该文用双载体转B结构域大部缺失型FVIII(BDD-FVIII)的重链和轻链基因， 将重链的Tyr664和轻链Thr1826突变为Cys， 研究了HEK293细胞共转基因后的基因表达、分泌至培养上清的重链量和凝血生物活性。用Western blot检测细胞裂解液结果显示， 非还原条件下有明显的二硫键交联的重、轻链蛋白; 链特异性ELISA定量检测细胞分泌的重链为(125±29) ng/mL， 明显高于共转野生型重链和轻链基因细胞的(75±23) ng/mL; Coatest法显示细胞分泌的凝血活性为(0.78±0.29) U/mL， 也明显高于共转野生型重链和轻链基因细胞(0.34±0.12) U/mL。结果表明， 重、轻链间的二硫键形成可提高双载体转FVIII基因的功效， 为进一步在动物体内转基因提供了实验依据。