rVvhA作用于THP-1细胞NF-κB信号通路的研究

摘要  研究重组创伤弧菌溶细胞素(rVvhA)对人单核细胞系(THP-1)NF-κB信号通路的影响。应用CCK-8法检测rVvhA对THP-1细胞增殖的抑制作用; 倒置显微镜和激光共聚焦显微镜观察rVvhA作用后细胞的形态学变化和细胞内NF-κB p65的核转移情况; 应用流式细胞仪和Westernblot检测rVvhA作用后细胞浆内和细胞核内NF-κB p65的表达情况; ELISA检测rVvhA作用于细胞后TNF-α、IL-6表达含量的变化。试验结果显示: rVvhA能够呈时间–剂量依赖性地抑制THP-1细胞的生长, 且镜下可见明显的细胞形态学变化。激光共聚焦显示0.4 HU/mL rVvhA作用6 h后, THP-1细胞内NF-κB p65的核转移现象最明显; 流式细胞仪结果显示0.6 HU/mL rVvhA作用2 h后, 细胞内总的NF-κB p65表达量达到高峰; Western blot检测显示0.6 HU/mL rVvhA作用4 h时细胞核内NF-κBp65蛋白含量最高; ELISA显示TNF-α的表达在rVvhA作用的适当范围内呈时间–剂量依赖性变化;IL-6在0.6 HU/mL rVvhA作用时表达量最高, 随后随着浓度的增加反而下降; NF-κB抑制剂能使IL-6表达量下调。实验证明rVvhA作用于THP-1细胞后能激活NF-κB信号通路, 上调TNF-α、IL-6的表达,而NF-κB抑制剂能够下调IL-6的表达。